グリオーマ亜集団標的型ナノDDSの創成と転写リプログラミング遺伝子治療への応用

靶向神经胶质瘤亚群的纳米 DDS 的创建及其在转录重编程基因治疗中的应用

• 批准号: 20J10668
• 负责人: 北村 啓太
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-24 至 2022-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20J10668/
• 关键词: グリオーマ; 血管擬態; DDS; アクティブターゲティング; 脳腫瘍; vascular mimicry; 核酸医薬

今年度は前年度に引き続き、グリオーマ亜集団の1つである血管擬態(vascular mimicry, VM)に特異的に発現する膜タンパク質の同定を試みた。前年度同定したGHR, PDGFRA, LEPRのmRNA発現バリデーションを定量的リアルタイムPCR法によりおこなった。その結果、これらの遺伝子のmRNA発現量が通常培養条件と比較して、VM条件下において顕著に増加することが明らかとなった。さらに、比較対象としてヒト脳毛細血管内皮細胞株であるHBMEC/ci18細胞を用いて、mRNA発現量の比較をおこなったところ、PDGFRA遺伝子はHBMEC/ci18細胞では発現が認められなかった。この結果は、本遺伝子が正常脳血管およびグリオーマでは発現せず、グリオーマ由来のVMに特異的に発現する可能性を示唆するものであった。これらの結果から、PDGFRAをグリオーマ由来VMのマーカー遺伝子として決定し、以降の解析をおこなった。次に、VM標的化素子の探索のため、3種類の抗PDGFRA抗体を用意しVMに対する標的化能の評価をおこなった。VM標的化能はMoradec社の2°ADC(secondary antibody-drug conjugate)技術を用いたスクリーニングにより評価した。本技術では、細胞障害性の化合物を付与した抗体を2次抗体として試験抗体と共に細胞に曝露することで、抗原を発現する細胞選択的な細胞毒性を誘導することが可能である。本解析の結果から、3種の抗PDGFRA抗体の中でabcam社の抗体が最も高い毒性を示したことから、この抗体をＶＭ標的化用の抗体として決定した。これらの結果から、同定した抗PDGFR抗体を標的化素子として利用することで、グリオーマにおけるVMを標的化することが可能になると期待される。

This year, compared with the previous year, we are trying to determine the identity of the membrane properties that are specifically found in vascular mimicry (VM). The mRNA expression of GHR, PDGFRA and LEPR was quantified by PCR in the previous year. The results showed that the mRNA expression of these genes increased under normal culture conditions and VM conditions. Comparison of mRNA expression in HBMEC/ci18 cells and PDGFRA gene expression in HBMEC/ci18 cells. The results showed that the presence of normal blood vessels and the presence of VM were possible. The result of this is that PDGFRA is the source of VM and the analysis of it. In addition, three types of anti-PDGFRA antibodies were used to evaluate the activity of VM target chemicals. VM standardization can be evaluated using Moradec's 2°ADC(secondary antibody-drug conjugate) technology. This technology allows for the induction of cellular toxicity by applying antibodies to secondary antibodies and by exposing cells to antigens. The results of this analysis show that among the three kinds of anti-PDGFRA antibodies, the most toxic antibody is the antibody used for VM. These results are consistent with those of the anti-PDGFR antibody target molecule, which is expected to be utilized, identified, and targeted.