分泌系インタラクトームによる基底膜コラーゲン極性輸送の解明

使用分泌相互作用组阐明基底膜胶原蛋白极性运输

• 批准号: 20J14688
• 负责人: 天宅 あや
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-24 至 2022-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20J14688/
• 关键词: 基底膜; IV型コラーゲン; 線維芽細胞; 腸上皮細胞; 共培養; 極性輸送

本研究では、上皮シートの基底面を支える細胞外マトリックスである基底膜がどのように形成されるのか？そのメカニズムについて、分子レベルで解明することを目指した。計画当初は上皮細胞におけるIV型コラーゲンの基底側への選択的な輸送のメカニズムについて、輸送関連因子のインタラクトーム解析により明らかにすることを予定していた。しかし昨年度までの検討から、解析に必要なIV型コラーゲン輸送を制御する実験系の確立が困難と判断された。一方、並行して行っていた基底膜形成培養系の検討では、胎児由来線維芽細胞（OUMS-36T-2細胞、以下36T-2細胞）を包埋したI型コラーゲンゲル上にヒト大腸上皮がん由来DLD-1細胞を共培養すると、DLD-1細胞の基底面に基底膜様構造が形成されることを見出した。また本共培養系では主に36T-2細胞がIV型コラーゲンを基底膜へ供給しており、DLD-1細胞からの寄与は極めて少ないことが示された。そこで計画当初の目的から方針転換し、線維芽細胞由来IV型コラーゲンの基底膜での会合機構について明らかにすることを目指した。はじめに蛍光標識したIV型コラーゲンを安定発現する36T-2細胞を樹立し、免疫染色や生細胞イメージングにより36T-2細胞由来IV型コラーゲンの行方を追った。その結果36T-2細胞はDLD-1細胞の基底部近傍でIV型コラーゲンを供給することが明らかとなった。さらに36T-2細胞の細胞運動に関与するアクチン結合タンパク質を発現抑制すると、IV型コラーゲン量が低下した。このことから36T-2細胞の運動性が基底膜中でのIV型コラーゲンの配向に必要であることが示唆された。上述の結果から、基底膜領域でのIV型コラーゲンの会合には上皮細胞基底部近傍での線維芽細胞の運動が必要であることが示された。以上により得られた研究成果は国際誌に投稿し、査読後修正中である。

In this study, the epithelium, the basal surface, the extracellular matrix, the basement membrane, the basement membrane, the base surface, the base membrane, the basement membrane, the base surface, the base surface I don't know. I don't know. I don't know what to do. It is planned that the selection of the epithelial cell, the type IV cell, the basal cell, the selected epithelial cell, the epithelial cell, the epithelial cell, the Last year, please tell me that it is necessary to make sure that it is difficult to make a decision. On one side, the formation of basement membrane was observed in parallel, and the germ cells of fetal origin (OUMS-36T-2 cells, the following 36T-2 cells) were embedded in the epithelial cells of DLD-1 cells, and the basement membranes of DLD-1 cells were co-cultured to form the basement membrane of fetal cells. In this co-culture system, the main 36T-2 cell, type IV cell, the basement membrane is supplied to the mother, and the DLD-1 cell is sent to the host. The original purpose of the project is to determine the origin of the type IV cell, the basement membrane rendezvous mechanism, the target device, the target device and the target device. The 36T-2 cells were isolated by immunostaining, and the cells of type IV were detected by immunostaining. The results showed that the cells of type IV were detected by immunostaining. Results the 36T-2 cell DLD-1 cell base near the base of the IV cell was supplied to the host cell. The combination of 36T-2 cell kinetic assay and cell cycle assay showed that the inhibition rate was significantly lower than that of the control group (type IV). In the basement membrane, type IV, type I, type IV, type IV, type IV, The results of the above results showed that type IV cells in the field of basement membrane rendezvous with epithelial cells near the base of epithelial cells to maintain the activity of germ cells. The above research results, international contributions, post-correction and post-correction.

项目成果

可視化IV型コラーゲンを用いた基底膜ダイナミクスの解析

使用可视化 IV 型胶原蛋白分析基底膜动力学

• 发表时间: 2021
• 作者: 松本崇宏;大西英里加;岡山真也;今堀大輔;太田智絵;吉田達貞;小島直人;山下正行;渡辺徹志;天宅あや
• 通讯作者: 天宅あや

間質細胞由来IV型コラーゲンががん細胞に与える影響

基质细胞衍生的 IV 型胶原蛋白对癌细胞的影响

• 发表时间: 2021
• 作者: 天宅あや;栗栖修作;高橋 章;米村重信
• 通讯作者: 米村重信