パラフィン切片における免疫組織診断のためのIV型コラーゲンα鎖の解析

用于石蜡切片免疫组织诊断的 IV 型胶原 α 链分析

• 批准号: 23931019
• 负责人: 小見山 高明
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-23931019/
• 关键词: 抗原賦活; IV型コラーゲン; 免疫組織染色

(研究目的)前回の奨励研究では6種類のIV型コラーゲンα(IV)鎖のうち、α3(IV)鎖とα4(IV)鎖の賦活ができなかった。また、前回抗原賦活が良好だった抗体はα(IV)鎖のコラーゲン領域を抗原として作製したものであり、NC1領域を抗原とした抗体の賦活は不良だった。これを改善するため、コラーゲン領域に作用する酵Collagenaseを用いて消化を行い、抗原賦活を試みた。(研究方法)抗原賦活の条件設定を行うためヒトの腎臓組織を用いた。これを腎生検によく使われるホルマリン固定とアルコールブアン固定の2種類の方法で固定し、通常の方法でパラフィン包埋した。Clostridium histolyticum由来のCollagenase(100units/ml)を2時間及び15時間パラフィン切片に作用させ、抗原賦活を行った。その後、6種類あるIV型コラーゲンα(IV)鎖を識別する24種類のα鎖特異抗体の反応性を確認した。また、反応性の良好なα鎖特異抗体を用いて、パラフィン切片の長期間保管による抗原賦活への影響を検討した。(研究成果)Collagenaseを用いた抗原賦活によりα1鎖～α6鎖の6種類すべてのα鎖を検出することができた。ヘマトキシリンによる核染も可能であった。抗原賦活は予想通り非コラーゲン領域特異抗体の反応性が高かった。-80℃、デシケーター、室内に約3年間保管したパラフィン切片でCollagenaseによる抗原賦活効果を調べた結果、ホルマリン固定切片では-80℃やデシケーターに保管した切片に比べ室内に保管した切片の反応性低下が明らかだった。アルコールブアン固定切片では保管方法の違いによる反応性に大きな差はなかった。以上、Collagenaseによる抗原賦活により全α(IV)鎖の解析が可能となったことから、本法はこの分野の研究に大きく貢献できることがわかった。さらに、Alport症候群の免疫組織診断においても、α5(IV)鎖だけでなくα3(IV)鎖、α4(IV)鎖の欠損も証明できることから、本法は本症診断に大きく貢献すると考える。

（研究目的）在先前的鼓励研究中，在六种类型的IV型胶原蛋白α（IV）链中，α3（iv）链和α4（iv）链无法激活。此外，上次使用α（iv）链的胶原蛋白作为抗原的胶原蛋白区域产生了抗原活化良好的抗体，并且使用NC1区域作为抗原的抗体被激活较差。为了改善这一点，使用发酵胶原酶消化尝试了抗原，该胶原酶作用于胶原蛋白区域。 （研究方法）人类肾脏组织用于设定抗原激活的条件。这是使用两种方法固定的：福尔马林固定和酒精bouan固定，通常用于肾脏活检中，并以通常的方式嵌入石蜡。将组织溶解度的胶原酶（100单位/mL）应用于石蜡切片2小时15小时以激活抗原。之后，确认了24种类型的α链特异性抗体的反应性，这些抗体区分了六种类型的IV型胶原蛋白α（IV）链的反应性。此外，使用具有良好反应性的α-链特异性抗体，研究了石蜡切片对抗原激活的长期储存的影响。 （研究结果）所有六个α链，α1至α6链都能够使用胶原酶检测抗原激活。还可以用苏木精染色。如预期的那样，抗原激活与非胶原特异性抗体具有高反应性。我们研究了胶原酶对在-80°C和干燥剂中储存在干燥剂中的石蜡切片的抗原检索作用约3年，并发现福尔马林固定切片与-80°C和desciccator相比，福尔马林固定切片的反应性降低。由于酒精bouin固定切片的不同存储方法，反应性没有显着差异。如上所述，所有α（IV）链的分析已经通过胶原酶激活使所有α（IV）链成为可能，并且发现该方法可以对该领域的研究产生重大贡献。此外，在Alport综合征的免疫组织化学诊断中，不仅可以证明α5（IV）链中的缺陷，还可以证明α3（IV）链和α4（IV）链中的缺陷，因此可以证明这种方法对这种疾病的诊断有很大贡献。

项目成果

Drosophila type XV/XVIII collagen, Mp, is involved in Wingless distribution

• DOI: 10.1016/j.matbio.2011.03.008
• 发表时间: 2011-05-01
• 期刊: MATRIX BIOLOGY
• 影响因子: 6.9
• 作者: Momota, Ryusuke;Naito, Ichiro;Ohtsuka, Aiji
• 通讯作者: Ohtsuka, Aiji

Collagenaseを用いた抗原賦活によるIV型コラーゲンα3鎖、α4鎖の解析

使用胶原酶进行抗原修复分析 IV 型胶原 α3 链和 α4 链

• 发表时间: 2011
• 作者: 内藤一郎;斎藤健司;小見山高明
• 通讯作者: 小見山高明

Clonal overgrowth of esophageal smooth muscle cells in diffuse leiomyomatosis-Alport syndrome caused by partial deletion in COL4A5 and COL4A6 genes

• DOI: 10.1016/j.matbio.2010.09.003
• 发表时间: 2011-01-01
• 期刊: MATRIX BIOLOGY
• 影响因子: 6.9
• 作者: Oohashi, Toshitaka;Naito, Ichiro;Ninomiya, Yoshifumi
• 通讯作者: Ninomiya, Yoshifumi

基底膜・IV型コラーゲン・Alport症候群

基底膜/IV型胶原/Alport综合征

• 发表时间: 2011
• 期刊: Priming biomedicine
• 作者: 内藤一郎;斎藤健司
• 通讯作者: 斎藤健司