パラフィン切片における免疫組織診断のためのIV型コラーゲンα鎖の解析

用于石蜡切片免疫组织诊断的 IV 型胶原 α 链分析

• 批准号: 23931019
• 负责人: 小見山 高明
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-23931019/
• 关键词: 抗原賦活; IV型コラーゲン; 免疫組織染色

(研究目的)前回の奨励研究では6種類のIV型コラーゲンα(IV)鎖のうち、α3(IV)鎖とα4(IV)鎖の賦活ができなかった。また、前回抗原賦活が良好だった抗体はα(IV)鎖のコラーゲン領域を抗原として作製したものであり、NC1領域を抗原とした抗体の賦活は不良だった。これを改善するため、コラーゲン領域に作用する酵Collagenaseを用いて消化を行い、抗原賦活を試みた。(研究方法)抗原賦活の条件設定を行うためヒトの腎臓組織を用いた。これを腎生検によく使われるホルマリン固定とアルコールブアン固定の2種類の方法で固定し、通常の方法でパラフィン包埋した。Clostridium histolyticum由来のCollagenase(100units/ml)を2時間及び15時間パラフィン切片に作用させ、抗原賦活を行った。その後、6種類あるIV型コラーゲンα(IV)鎖を識別する24種類のα鎖特異抗体の反応性を確認した。また、反応性の良好なα鎖特異抗体を用いて、パラフィン切片の長期間保管による抗原賦活への影響を検討した。(研究成果)Collagenaseを用いた抗原賦活によりα1鎖～α6鎖の6種類すべてのα鎖を検出することができた。ヘマトキシリンによる核染も可能であった。抗原賦活は予想通り非コラーゲン領域特異抗体の反応性が高かった。-80℃、デシケーター、室内に約3年間保管したパラフィン切片でCollagenaseによる抗原賦活効果を調べた結果、ホルマリン固定切片では-80℃やデシケーターに保管した切片に比べ室内に保管した切片の反応性低下が明らかだった。アルコールブアン固定切片では保管方法の違いによる反応性に大きな差はなかった。以上、Collagenaseによる抗原賦活により全α(IV)鎖の解析が可能となったことから、本法はこの分野の研究に大きく貢献できることがわかった。さらに、Alport症候群の免疫組織診断においても、α5(IV)鎖だけでなくα3(IV)鎖、α4(IV)鎖の欠損も証明できることから、本法は本症診断に大きく貢献すると考える。

(Purpose) The previous study on excitation of 6 types of type IV alpha (IV) locks, alpha 3(IV) locks and alpha 4(IV) locks Antigen activation is good for α(IV) domain antigen activation is bad for NC domain antigen activation. This is the first time that we've seen this. (Method of study) The conditions for antigen activation were set up. There are two kinds of methods for fixing and embedding. Collagenase from Clostridium histolyticum (100units/ml) for 2 hours and 15 hours The reactivity of six types of alpha (IV)-specific antibodies was confirmed. To investigate the effects of long-term storage on antigen activation of anti-alpha-specific antibodies with good anti-alpha-specificity (Research results)Collagenase is activated by six types of α 1-α6 locks and detected by α 1-α6 locks. The nuclear power plant Antigen activation is not a problem. Domain specific antibodies are highly reactive. 80℃, indoor storage for about 3 years, antigen-activating effect, antigen-fixing section,-80℃, indoor storage for about 3 years The method of storage of the fixed sections of the glass is not suitable for the purpose of reflection. The above, Collagenase antigen activation, full α(IV) lock analysis, this method of separation of the field of research, the contribution of large In addition, this method contributes greatly to the diagnosis of Alport syndrome due to the lack of evidence for α3(IV) lock and α4(IV) lock.

项目成果

Drosophila type XV/XVIII collagen, Mp, is involved in Wingless distribution

• DOI: 10.1016/j.matbio.2011.03.008
• 发表时间: 2011-05-01
• 期刊: MATRIX BIOLOGY
• 影响因子: 6.9
• 作者: Momota, Ryusuke;Naito, Ichiro;Ohtsuka, Aiji
• 通讯作者: Ohtsuka, Aiji

Collagenaseを用いた抗原賦活によるIV型コラーゲンα3鎖、α4鎖の解析

使用胶原酶进行抗原修复分析 IV 型胶原 α3 链和 α4 链

• 发表时间: 2011
• 作者: 内藤一郎;斎藤健司;小見山高明
• 通讯作者: 小見山高明

Clonal overgrowth of esophageal smooth muscle cells in diffuse leiomyomatosis-Alport syndrome caused by partial deletion in COL4A5 and COL4A6 genes

• DOI: 10.1016/j.matbio.2010.09.003
• 发表时间: 2011-01-01
• 期刊: MATRIX BIOLOGY
• 影响因子: 6.9
• 作者: Oohashi, Toshitaka;Naito, Ichiro;Ninomiya, Yoshifumi
• 通讯作者: Ninomiya, Yoshifumi

基底膜・IV型コラーゲン・Alport症候群

基底膜/IV型胶原/Alport综合征

• 发表时间: 2011
• 期刊: Priming biomedicine
• 作者: 内藤一郎;斎藤健司
• 通讯作者: 斎藤健司