Association of proviral load and the number of infected cell in bovine leukemia virus infection

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牛伝染性リンパ腫ウイルス（BLV）は主にB細胞に感染し，宿主のDNA中にプロウイルスとして組み込まれ持続感染する。BLV感染牛は病態が進行すると，感染牛の２～３％がB細胞性のリンパ腫，すわなち、牛伝染性リンパ腫（EBL）を発症する。EBLはBLVを原因とする伝染病で，国内のEBLの発生頭数は増加傾向にある。BLV感染の診断はELISAによる抗体検出の他，Nested PCR法やqPCR法によるプロウイルス遺伝子の検出があり，qPCR法はプロウイルス量の定量も可能である。BLVに対するワクチンや治療法はなく，感染拡大を防ぐためにはBLV感染牛を摘発・淘汰または隔離飼育するしかない。しかし，米国や日本を含むアジア諸国ではBLVの感染率が非常に高いため，全てのBLV感染牛を淘汰することは難しい。そこでわが国では，BLV感染牛のプロウイルス量に基づく対策が推奨されている。これらの対策を実施するためには，感染牛のプロウイルス量を定量する必要がある。しかしながら、プロウイルスの定量検査にかかる費用を理由に、プログラムへの参加を断念する地域も少なくない。BLV対策への取り組みをさらに加速させるためには、より簡便で安価な定量法を開発する必要がある。そこで本研究では、デジタルPCRを用いた定量法の開発と、簡便かつ安価なDNA抽出方法を開発した。本研究によって創出した革新的な技術は次の3点である。一つは，世界で初めてBLVに対する絶対定量技術を確立したこと。次に，DNA精製が不要な簡易抽出法をデジタルPCR法でも実現したこと。最後に，血液1滴というごく微量なサンプルからプロウイルス量を高精度に定量できたことである。畜産領域においてこの技術を利用した報告はなく，本研究が世界で初めての技術となる。