Association of proviral load and the number of infected cell in bovine leukemia virus infection

牛白血病病毒感染中原病毒载量与感染细胞数的关系

• 批准号: 20K06413
• 负责人: 関口 敏
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: University of Miyazaki
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K06413/
• 关键词: 牛伝染性リンパ腫; プロウイルス; デジタルPCR; 絶対定量; マルチプロウイルス; 牛白血病; 疫学; 防疫; リスク分析

牛伝染性リンパ腫ウイルス（BLV）は主にB細胞に感染し，宿主のDNA中にプロウイルスとして組み込まれ持続感染する。BLV感染牛は病態が進行すると，感染牛の２～３％がB細胞性のリンパ腫，すわなち、牛伝染性リンパ腫（EBL）を発症する。EBLはBLVを原因とする伝染病で，国内のEBLの発生頭数は増加傾向にある。BLV感染の診断はELISAによる抗体検出の他，Nested PCR法やqPCR法によるプロウイルス遺伝子の検出があり，qPCR法はプロウイルス量の定量も可能である。BLVに対するワクチンや治療法はなく，感染拡大を防ぐためにはBLV感染牛を摘発・淘汰または隔離飼育するしかない。しかし，米国や日本を含むアジア諸国ではBLVの感染率が非常に高いため，全てのBLV感染牛を淘汰することは難しい。そこでわが国では，BLV感染牛のプロウイルス量に基づく対策が推奨されている。これらの対策を実施するためには，感染牛のプロウイルス量を定量する必要がある。しかしながら、プロウイルスの定量検査にかかる費用を理由に、プログラムへの参加を断念する地域も少なくない。BLV対策への取り組みをさらに加速させるためには、より簡便で安価な定量法を開発する必要がある。そこで本研究では、デジタルPCRを用いた定量法の開発と、簡便かつ安価なDNA抽出方法を開発した。本研究によって創出した革新的な技術は次の3点である。一つは，世界で初めてBLVに対する絶対定量技術を確立したこと。次に，DNA精製が不要な簡易抽出法をデジタルPCR法でも実現したこと。最後に，血液1滴というごく微量なサンプルからプロウイルス量を高精度に定量できたことである。畜産領域においてこの技術を利用した報告はなく，本研究が世界で初めての技術となる。

B-cell infection is caused by the presence of B-cells in the host DNA, and the presence of B-cells in the host DNA is caused by the presence of B-cells. BLV infected cattle are pathologically advanced, and 2 - 3% of infected cattle are infected with B cell disease, such as bovine infectious disease (EBL). The number of EBL cases in China tends to increase due to BLV infection. Diagnosis of BLV infection includes ELISA, Nested PCR and qPCR for detection of antibodies, and qPCR for quantification of antibodies. BLV infection prevention and elimination The infection rate of BLV in China and Japan is very high, and it is difficult to eliminate all BLV infected cattle. The number of BLV infected cattle is estimated to have increased significantly. If these measures are to be implemented, it is necessary to quantify the amount of protein in infected cattle. There is no reason to pay for the quantitative examination of the project, and there is no reason to pay for the participation of the project. The development of a simple, safe and quantitative method for BLV strategy is essential. In this study, we developed a simple and quantitative method for DNA extraction by PCR. This study is aimed at creating innovative technologies. The world is beginning to develop a quantitative approach. In addition, DNA purification should be carried out by simple PCR method. Finally, a drop of blood can be quantified with high precision. This paper reports on the utilization of technologies in the livestock field, which is the first time in the world.

项目成果

防疫支援装置，防疫支援方法及びプログラム

防疫保障设备、防疫保障方法及方案

• 发表时间: 2020

ベンハー大学(エジプト)

本虚尔大学（埃及）

Development of droplet digital PCR for quantification of bovine leukemia virus proviral load using unpurified genomic DNA

开发使用未纯化的基因组 DNA 定量牛白血病病毒原病毒载量的液滴数字 PCR

• DOI: 10.1016/j.jviromet.2023.114706
• 发表时间: 2023
• 期刊: Journal of Virological Methods
• 影响因子: 3.1
• 作者: Wu Xinyue;Notsu Kousuke;Matsuura Yuichi;Mitoma Shuya;El Daous Hala;Norimine Junzo;Sekiguchi Satoshi
• 通讯作者: Sekiguchi Satoshi

対立遺伝子の検出方法及び対立遺伝子の検出キット

等位基因检测方法及等位基因检测试剂盒

• 发表时间: 2021

抗病性及び病原体遺伝子の同時検査法並びに抗病性及び病原体遺伝子の同時検査キット

抗病与病原基因同时检测方法及抗病与病原基因同时检测试剂盒

• 发表时间: 2022