Studies on development of control measures of Cryptocaryon irritans infectios based on integrated pest management

基于病虫害综合治理的感染白点虫防治措施研究

基本信息

批准号：
19H00948
负责人：
良永知義
金额：
$ 28.12万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19H00948/
关键词：
Cryptocaryon irritans 海産白点虫総合的病虫害管理ワクチン光反応性産魚の白点虫概日リズムイオノフォア in vitro 培養寄生性せん毛虫海産白点病病害防除海産魚の白点虫光受容プロテアーゼ魚類寄生虫総合的病害虫管理

项目摘要

本研究の4つの大課題（Ⅰ. 海産白点虫の生態学的特性に基づく発生予測技術の検討、Ⅱ．化学療法剤の探索と有効性・安全性の検討、Ⅲ. 寄生関連タンパク分解酵素を抗原としたワクチンの検討、Ⅳ. 新たなin vitro培養法の開発）のうち、当該年度は、IとⅢを中心に研究を実施した。そのうち、Iについては、海産白点虫のもつサーカディアンリズムに関して、トランスクリプトーム解析とin silico探索の結果、光反応性に関与している可能性の高い遺伝子を見つけることができた。また、養殖現場での白点虫の時空間的分布のために開発してqPCR法について、その精度の検討を行ったが、調査に使用できるレベルの精度をえることはできなかった。Ⅲについては、これまでの研究では、海産白点虫のタンパク分解酵素をターゲットした組み換えタンパク質やDNAワクチンは一定の効果はあったものの、著効を示すには至らなかった。そこで、抗原タンパクを培養可能な繊毛虫に発現させ、これを抗原として用いるワクチンの作出を考え、外来たんぱく質にGPIアンカーとシグナルペプチドを付与することで、外来たんぱく質を培養可能な繊毛虫Tetrahymenaの細胞表面に発現させる方法を確立した。加えて、株による抗原型の違いの解析をおこなうため、実際の養殖場で発生している白点虫株を得た。IVについては、これまで使用した二層培養法の改良を目指したが、二層培養では成長したトロフォントの回収効率を飛躍的に高めることは困難であるという結論に達した。

在这项研究的四个主要问题中（I.基于海洋白昆虫的生态特征的发育预测技术的研究； ii。探索化学治疗剂的探索以及对疗效和安全性的检查； iii。使用寄生虫相关的蛋白水解酶对疫苗进行研究，作为抗原的抗原；作为抗原的抗原； iv。其中，对于I，发现转录组分析和在硅酸盐中寻找海洋白点的昼夜节律，发现可能参与光反应性。此外，尽管开发了用于水产养殖场中白点昆虫的时空分布的QPCR方法，但研究了QPCR方法的准确性，但不可能达到可用于研究的准确性水平。关于III，先前的研究表明，尽管从海洋白昆虫靶向蛋白水解酶的重组蛋白和DNA疫苗具有一定的作用，但它们无法显示出任何显着作用。因此，我们已经建立了一种在可栽培纤毛中表达抗原蛋白的方法，并使用它作为抗原创建疫苗，并通过将外部蛋白与GPI锚固剂和信号肽组装在一起，以表达外部蛋白质在纤毛的细胞表面上表达外部蛋白质，可以培养蛋白膜的蛋白质。此外，为了分析菌株之间抗原类型的差异，我们获得了在实际的水产养殖场中发生的白点菌株。关于IV，我们旨在改善现在使用的双层培养方法，但我们得出的结论是，很难大大提高具有双层培养的Trofonts的恢复效率。

项目成果

期刊论文数量（7）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Functional analysis of the proteases overexpressed during the invasive and parasitic stages of Cryptocaryon irritans and their potential as vaccine antigens

刺激白点虫侵入和寄生阶段过度表达的蛋白酶的功能分析及其作为疫苗抗原的潜力

DOI：
10.1016/j.aquaculture.2021.736657
发表时间：
2021
期刊：
Aquaculture
影响因子：
4.5
作者：
Yuho Watanabe;Kosuke Zenke;Naoki Itoh;TomoyoshiYoshinaga
通讯作者：
TomoyoshiYoshinaga

Evaluation of the protective effects of DNA vaccines encoding an infection-related cysteine protease from Cryptocaryon irritans, the pathogenic organism of cryptocaryoniasis

编码来自隐核虫（隐核虫病的病原生物）感染相关半胱氨酸蛋白酶的 DNA 疫苗的保护作用评估

DOI：
10.1016/j.aquaculture.2021.737641
发表时间：
2022
期刊：
Aquaculture
影响因子：
4.5
作者：
Yuho Watanabe;Yuzo Takada;Maho Kotake;Kosuke Zenke;Naoki Itoh;Tomoyoshi Yoshinaga
通讯作者：
Tomoyoshi Yoshinaga

海産白点虫プロテアーゼの感染防御抗原としての有効性

海洋白斑蛋白酶作为抗原预防感染的功效

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
Watanabe Y;How K;Zenke K;Itoh N;Yoshinaga T.;渡邊勇歩・麻田正仁・井ノ口繭・小竹真帆・伊藤直樹・良永知義;渡邊勇歩・How Kah Hui・善家孝介・今城雅之・白樫正・伊藤直樹・良永知義
通讯作者：
渡邊勇歩・How Kah Hui・善家孝介・今城雅之・白樫正・伊藤直樹・良永知義

テトラヒメナを用いた偽海産白点虫の作製に向けた研究

利用四膜虫生产拟海洋白斑虫的研究