Studies on development of control measures of Cryptocaryon irritans infectios based on integrated pest management

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本研究の4つの大課題（Ⅰ. 海産白点虫の生態学的特性に基づく発生予測技術の検討、Ⅱ．化学療法剤の探索と有効性・安全性の検討、Ⅲ. 寄生関連タンパク分解酵素を抗原としたワクチンの検討、Ⅳ. 新たなin vitro培養法の開発）のうち、当該年度は、IとⅢを中心に研究を実施した。そのうち、Iについては、海産白点虫のもつサーカディアンリズムに関して、トランスクリプトーム解析とin silico探索の結果、光反応性に関与している可能性の高い遺伝子を見つけることができた。また、養殖現場での白点虫の時空間的分布のために開発してqPCR法について、その精度の検討を行ったが、調査に使用できるレベルの精度をえることはできなかった。Ⅲについては、これまでの研究では、海産白点虫のタンパク分解酵素をターゲットした組み換えタンパク質やDNAワクチンは一定の効果はあったものの、著効を示すには至らなかった。そこで、抗原タンパクを培養可能な繊毛虫に発現させ、これを抗原として用いるワクチンの作出を考え、外来たんぱく質にGPIアンカーとシグナルペプチドを付与することで、外来たんぱく質を培養可能な繊毛虫Tetrahymenaの細胞表面に発現させる方法を確立した。加えて、株による抗原型の違いの解析をおこなうため、実際の養殖場で発生している白点虫株を得た。IVについては、これまで使用した二層培養法の改良を目指したが、二層培養では成長したトロフォントの回収効率を飛躍的に高めることは困難であるという結論に達した。