幹細胞活性を持つCML微小残存病変の検出法開発と特性解明

具有干细胞活性的CML微小残留病灶的检测方法和表征的开发

• 批准号: 19J00502
• 负责人: 笠原 秀範
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: National Center for Global Health and Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-25 至 2022-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19J00502/
• 关键词: 慢性骨髄性白血病; 微小残存病変; 次世代シーケンサー

初発時の慢性骨髄性白血病（Chronic Myeloid Leukemia; CML）患者骨髄血から抽出したDNAに対して次世代シーケンサー（Next Generation Sequencing; NGS）で22番と9番染色体の転座ゲノム切断点であるBreak pointを塩基配列レベルで同定した。Break pointは患者ごとに全く異なり、患者特異性が極めて高い配列である。CML治療後の微小残存病変（Minimal Residual Disease; MRD）検出のために最終的にはNGSを用いたが、その値の定量を行うために、PCR（Polymerase ChainReaction）の中でも絶対定量が可能な手法であるデジタルPCR（dPCR）を用いた。MRDが患者のどの成分の中に含まれているものであるのかを細かく分画化して検索すべく、治療後の患者検体（骨髄血および末梢血）Flow cytometryにて細胞集団ごとにsortingして集め、DNA抽出した。初発時サンプルに対するNGS解析により、15例の患者のうち14例でBreak pointを塩基レベルで正確に同定できた。dPCRでは、RNSPを用いた解析によりすべての治療後フローサイトソーティングを行った微量サンプルにゲノムが含まれていることを確認できた。また、dPCRでは検出できなかったサンプルでも解析精度の向上が見られた。2回PCRを行うことでBCR/ABL1存在頻度の直接定量ができなかった点についても、検量線サンプルをNGS解析時に加えることで定量可能となった。上記の手法の確立を進めたのち、TKI治療中の7名の患者に関して骨髄血および末梢血それぞれを4分画に細分化した集団から抽出したDNAに対してNGSによるMRD解析、およびその定量化を行ったデータをまとめて論文化した。

In patients with Chronic Myeloid Leukemia (CML) at the onset, bone marrow DNA is extracted and linked to the Next Generation Sequencing (NGS). Chromosome 22 and chromosome 9 are linked to the Break point. Break point is patient specific. The detection of minimal residual disease (MRD) after CML treatment is the final step in the quantification of NGS and PCR (Polymerase chain reaction). MRD is composed of the following components: cell sorting, DNA extraction, and cell culture. NGS analysis was performed in 15 patients at initial onset and 14 patients at Break point. dPCR is used to analyze the contents of the treatment. The accuracy of the analysis was improved when the PCR was detected. 2-loop PCR analysis of BCR/ABL1 presence frequency and direct quantification of BCR/ABL1 presence frequency and NGS analysis of BCR/ABL1 presence frequency. In the past, 7 patients were treated with TKI, and the MRD analysis and quantification of DNA were analyzed.

项目成果

Detection of residual disease in chronic myeloid leukemia utilizing genomic next generation sequencing reveals persistence of differentiated Ph+ B cells but not bone marrow stem/progenitors

• DOI: 10.1080/10428194.2020.1837366
• 发表时间: 2020-10
• 期刊: Leukemia & Lymphoma
• 影响因子: 2.6
• 作者: Daiki Karigane;H. Kasahara;Kouhei Shiroshita;S. Fujita;Hiroshi Kobayashi;Shinpei Tamaki;R. Yamazaki-

特許権

专利权

• 发表时间: 2018

Successful Treatment of End-stage Renal Disease in a Patient With Chronic Myeloid Leukemia by Kidney Transplantation and Tyrosine Kinase Inhibitors: A Case Report

通过肾移植和酪氨酸激酶抑制剂成功治疗慢性粒细胞白血病患者的终末期肾病：病例报告

• DOI: 10.1016/j.transproceed.2019.10.035
• 发表时间: 2020
• 期刊: Transplantation Proceedings
• 影响因子: 0.9
• 作者: Kazunobu Shinoda ;Shinya Morita ;Satoshi Tamaki ;Ryohei Takahashi ;Sotaro Kitaoka ;Hiroshi Asanuma ;Tadashi Yoshida ;Mikio Okayama ;Hidenori Kasahara ;Shinichiro Okamoto ;Mototsugu Oya
• 通讯作者: Mototsugu Oya

The Clinical Findings and Biology of CD25 As a Stem Cell Marker of CML

CD25 作为 CML 干细胞标志物的临床发现和生物学

• 发表时间: 2019
• 作者: Hidenori Kasahara;Daiki Karigane;Shinichiro Okamoto;Keiyo Takubo
• 通讯作者: Keiyo Takubo