細胞内(形質膜)温度と温度感受性TRPチャネル電流の同時測定システムの確立

细胞内（质膜）温度和温敏TRP通道电流同时测量系统的建立

• 批准号: 19J01974
• 负责人: 宇治澤 知代
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Center for Novel Science Initatives, National Institutes of Natural Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-25 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19J01974/
• 关键词: TRPチャネル; 細胞内温度; パッチクランプ; 温度感受性; 温度プローブ; I

温度感受性TRPチャネルの活性化温度閾値は膜電流とパッチクランプされた細胞近傍の溶液温度の変化を同時計測することで決定されている。しかし熱刺激を与えた際の細胞内温度、さらにはTRPチャネルが発現する形質膜付近の温度が実際にどのように変化しているのかはわかっていない。本研究では、細胞に熱刺激を与え、その時の細胞内温度の変化と膜電流の同時計測をおこない、これまでに報告されている温度感受性TRPチャネルの活性化温度閾値との比較をおこなった。細胞内温度の計測には、1励起2蛍光型の蛍光温度プローブを用い、この蛍光温度プローブを細胞へ導入し、熱刺激を与えた前後のレシオ値を解析した。また、従来パッチクランプを行う際に使用される顕微鏡システムでは熱刺激を与えた際の蛍光画像の取得が困難であったため、新たに同時計測用のシステムを組む必要があった。そこで、顕微鏡としては共焦点顕微鏡を使用することにした。共焦点顕微鏡には赤外線レーザーが温度刺激装置として搭載されているため、温度刺激によるフォーカスのズレがほとんど起こらない。この同時計測システム上で、温度感受性TRPチャネルを強制発現させたHEK293細胞に蛍光温度プローブを導入して解析をおこなった。温度感受性TRPチャネルとして、まずrat TRPV1を用いて同時計測を試みた。HEK293細胞でのrat TRPV1の定常発現株を使用し、はじめにHEK293細胞へのプローブの導入条件の検討、画像取得条件の検討、赤外線レーザーに対する応答確認をおこない、条件検討の上、同時計測をおこなった。

The activation temperature threshold of temperature-sensitive TRP cells is determined by simultaneous measurement of the temperature of the solution near the cells. The intracellular temperature during thermal stimulation, TRP generation, and plasma membrane temperature during thermal stimulation In this study, we compared the temperature threshold of TRP activation with the temperature threshold of TRP activation measured simultaneously by measuring the intracellular temperature and membrane current at the time of thermal stimulation. The measurement of intracellular temperature, 1 excitation, 2 excitation, 2 excitation, 3 excitation, 2 excitation, 3 excitation, 4 excitation, 5 excitation, excitation, 5 excitation, excitation, excitation, It is difficult to obtain a picture of a person using a micro-mirror when performing a task. A common focal point is used for micromirrors. The confocal micro-mirror is equipped with an infrared light source and a temperature stimulating device. The simultaneous measurement of temperature and temperature sensitivity of TRP induced stress in HEK293 cells Temperature sensitivity TRP is measured simultaneously with TRPV1. HEK293 cells rat TRPV1 steady state production plant to use, and then to HEK293 cell culture conditions for the introduction of the study, image acquisition conditions for the study, infrared light for the study of the response confirmation, conditions for the study, and simultaneous measurement.