抗マラリア薬アルテスネートを用いたがん予防法の開発とその分子機構の解明

抗疟药物青蒿琥酯预防癌症方法的开发及其分子机制的阐明

• 批准号: 19J10184
• 负责人: 鱧屋 隆博
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: National Cancer Center Japan (2020)Tokyo University of Science (2019)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-25 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19J10184/
• 关键词: アルテスネート; がん予防; ドラッグリポジショニング; 大腸がん; Wntシグナル; 家族性大腸腺腫症モデルマウス

昨年度に引き続き、アルテスネートによる腸発がん抑制効果について、培養細胞およびモデル動物(マウス)を用いて検討を行った。本年度は、まず昨年度に質量分析にて解析を行ったアルテスネート結合タンパクの候補集団から真の結合タンパクを導き出すことを実施した。方法として、siRNAを用いて各候補タンパクの発現をノックダウンさせ、TCF/LEF転写活性(Wntシグナル)への影響を評価した。さらに、各タンパクの発現レベルが減少している状態でアルテスネートを投与した際、TCF/LEF転写活性の抑制効果が消失するかを検討した。その結果、最終的にアルテスネート結合タンパクとして、RANタンパクを同定した。RANタンパクは、細胞質核間輸送制御因子として知られており、主にNLS配列を持つタンパクを細胞質から核へと輸送制御している。次に、ウエスタンブロッティング法を用いてアルテスネート投与によるRANタンパクの発現レベルを検討したところ、影響は見られなかった。このことから、アルテスネートはRANタンパクの発現を抑えるのではなく、機能を阻害していると考え、Wntシグナル関与タンパクの中でNLS配列を含んでいるTCF4とTCF1/TCF7に着目した。そして、アルテスネート投与時のTCF4とTCF1/TCF7のタンパク発現量を検討したところ、TCF1/TCF7においてアルテスネート投与による発現レベルの減少が確認された。さらに、免疫蛍光染色法を用いてTCF1/TCF7の細胞内局在を評価したところ、アルテスネート投与によって核内の発現量が減少すると共に、細胞質の発現量が増加することが確認された。以上の結果より、アルテスネートは、RANタンパクに結合することでTCF1/TCF7の核内移行を阻害することを示したと共に、最終的に、Wntシグナルが制御する細胞増殖および腸ポリープ生成数を抑制することを明らかにした。

In the past year, the development of cell culture and animal culture has been studied. This year, the quality analysis was carried out in combination with the candidate set. Methods: To evaluate the effect of siRNA on the development of TCF/LEF gene expression. In addition, the occurrence of each component is reduced, and the occurrence of TCF/LEF activity is reduced when the component is activated. The result, the final result, the final result The expression of a protein in the cytoplasm of a cell is related to the expression of a protein in the cytoplasm. The second time, it is necessary to use the method of production and the method of production to discuss the impact of production. The NLS configuration includes TCF4 and TCF1/TCF7. The NLS configuration includes TCF4 and TCF1/TCF7. TCF4, TCF1/TCF7 and TCF4/TCF7 are considered to be the most important factors in determining the occurrence of the disease. In addition, immunofluorescence staining was used to evaluate the intracellular structure of TCF1/TCF7, and it was confirmed that the amount of intracellular protein was decreased and the amount of cytoplasmic protein was increased. The above results show that the inhibition of TCF1/TCF7 nuclear migration is the most important factor in the inhibition of cell proliferation and proliferation.

项目成果

既存薬を用いたがん化学予防剤スクリーニング

利用现有药物进行癌症化学预防药物筛选

• 发表时间: 2019
• 作者: 鱧屋隆博;藤井元;高橋麻衣子;小宮雅美;成田匠;黒川友理絵;松澤優衣;三木洸平;照屋貴宏;十島二朗;武藤倫弘
• 通讯作者: 武藤倫弘

Inhibition of Wnt signaling in human colorectal cancer cells by artesunate

青蒿琥酯抑制人结直肠癌细胞中 Wnt 信号传导

• 发表时间: 2019
• 作者: Takahiro Hamoya;Gen Fujii;Masami Komiya;Narita Takumi;Yui Matsuzawa;Kohei Miki;Takahiro Teruya;Michihiro Mutoh
• 通讯作者: Michihiro Mutoh

ヒト大腸がん由来培養細胞におけるアルテスネイトによるWntシグナル抑制機構の解明

阐明青蒿琥酯在人结肠癌培养细胞中抑制 Wnt 信号的机制

• 发表时间: 2020
• 作者: 鱧屋 隆博;藤井 元 ;飯泉 陽介;小宮 雅美;成田 匠 ;曽和 義広 ;渡邉 元樹;増田 光治 ;武藤 倫弘
• 通讯作者: 武藤 倫弘