デュシェンヌ型筋ジストロフィーに対する新規遺伝子治療法の開発

杜氏肌营养不良症新基因治疗方法的开发

• 批准号: 19J10268
• 负责人: 伴野 太郎
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-25 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19J10268/
• 关键词: 遺伝子治療; デュシェンヌ型筋ジストロフィー; マイクロジストロフィン; 免疫プロテアソーム; ゲノム編集

デュシェンヌ型筋ジストロフィー(DMD)は、ジストロフィン遺伝子に変異・欠失が起こり生じる遺伝性疾患である。治療法として正常なジストロフィン遺伝子を外部から投与する遺伝子治療が研究されている。正常なジストロフィン遺伝子を運搬する役目としてアデノ随伴ウイルスベクター(rAAV)が注目されている。安全性が高いrAAVは遺伝子治療によく用いられるが、搭載できる遺伝子の大きさが限られており、巨大なジストロフィン遺伝子は全長を搭載できない。そのため、ジストロフィン遺伝子を短縮したマイクロジストロフィン(uDys)をrAAVに搭載し、患者に投与する。DMD遺伝子治療の課題の一つは、uDysタンパク質に対する免疫応答とともに、rAAVベクターゲノムに対する免疫応答である。ベクターゲノムに対する免疫応答が起こる理由として、uDys搭載ベクターゲノムに存在するウイルス由来配列(ITR)、およびrAAVに誤ってパッケージングされたプラスミドバックボーンが非自己として認識されることが挙げられる。そこで本研究では、ウイルス由来配列を最小限にし、さらにプラスミドバックボーンがパッケージングされないよう、PCR増幅線状化ベクターゲノムを用いたrAAVの作製を試みた(rAAV-L-AD)。まず、rAAV-L-ADと従来型rAAVのパッケージング・発現効率を比較した。パッケージング効率に関して、rAAV-L-ADは従来型と同等であったが、発現効率に関しては従来型より劣っていた。一方で、線状化ベクターゲノムの代わりにshRNAを搭載したrAAV-L-AD-shRNAを作製したところ、これは標的遺伝子の発現を劇的に減少させることがわかった。次に、キャプシドにパッケージングされたプラスミドバックボーンの混入率を調べたところ、従来型では数多くの混入が確認されたが、rAAV-L-ADでは有意に減少していた。

The disease is caused by the occurrence of various diseases. Treatment: A study of the treatment of normal subjects by external means. The normal transmission of the virus is carried out with the help of the virus (rAAV) High safety rAAV gene therapy can be used in a variety of ways, including: Sanyotama, jisrotolu One of the problems of DMD gene therapy is that uDys gene therapy has a high immune response, and rAAV gene therapy has a high immune response. The reason why the immune response is initiated is that uDys is equipped with a set of conditions, such as the origin of the list (ITR), the error of the rAAV, the identification of the immune response, and the identification of the immune response. In this study, we tested the rAAV production (rAAV-L-AD) by PCR amplification and linear analysis. Comparison of RAV and RAV-L-AD performance For example, if you want to change your mind, you can change your mind. The expression of the target gene was significantly reduced when the AAV-L-AD-shRNA was produced in a linear fashion. The mixing ratio of the secondary and secondary components is adjusted accordingly. The mixing ratio of the secondary components is adjusted accordingly.

项目成果

Stability of rAAV serotype 1, 2, 8, 9 and wild-type AAV2 under various conditions

rAAV血清型1、2、8、9和野生型AAV2在各种条件下的稳定性

• 发表时间: 2019
• 作者: Taro Tomono;Yukihiko Hirai;Hideto Chono;Shuohao Huang;Yasuhiro Kawano;Junichi Mineno;Akiko Ishii;Akira Tamaoka;and Takashi Okada
• 通讯作者: and Takashi Okada

Comparative stability analysis of recombinant AAV and wild-type AAV under various conditions to consider environmental effect assessment

重组AAV和野生型AAV在各种条件下的稳定性比较分析，考虑环境影响评估

• 发表时间: 2019
• 作者: Taro Tomono;Yukihiko Hirai;Hideto Chono;Junichi Mineno;Akiko Ishii;Akira Tamaoka;Masafumi Onodera;Takashi Okada
• 通讯作者: Takashi Okada

Infectivity Assessment of Recombinant Adeno-Associated Virus and Wild-Type Adeno-Associated Virus Exposed to Various Diluents and Environmental Conditions

暴露于各种稀释剂和环境条件下的重组腺相关病毒和野生型腺相关病毒的感染性评估

• DOI: 10.1089/hgtb.2019.082
• 发表时间: 2019
• 期刊: Human Gene Therapy Methods
• 作者: Taro Tomono;Yukihiko Hirai;Hideto Chono;Junichi Mineno;Akiko Ishii;Masafumi Onodera;Akira Tamaoka;Takashi Okada
• 通讯作者: Takashi Okada

Establishment of a novel strategy to encapsidate a PCR-amplified transgene fragment into recombinant adeno-associated virus capsid without non-vector genome packaging

建立一种新策略，将 PCR 扩增的转基因片段装入重组腺相关病毒衣壳中，无需非载体基因组包装

• 发表时间: 2020
• 作者: Kumi Adachi;Taro Tomono;Hironori Okada;Yusuke Shiozawa;Yoshitaka Miyagawa;Takashi Okada
• 通讯作者: Takashi Okada