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ケラチノサイト増殖因子内包化多角体を用いた上皮細胞の三次元培養モデルの構築

利用角质形成细胞生长因子封装多面体构建上皮细胞三维培养模型

基本信息

批准号：
19J14594
负责人：
丸田莉奈
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Kyoto Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-25 至 2021-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

Fibroblast growth factor-7 (FGF-7)多角体を作るカイコの絹糸腺から作製したテグスを用いて表皮モデルを構築し、モデルとしての有用性を検討した。多角体とは、昆虫ウイルスが産生するタンパク質微結晶である。この結晶の中に任意のタンパク質を包埋することができ、包埋されたタンパク質は安定に保たれ、少しずつ放出される。本研究ではケラチノサイト細胞増殖因子であるFGF-7を多角体に包埋し、絹糸腺で発現する遺伝子組換えカイコを作出した。絹糸腺は、繭タンパク質を発現する組織で組換えタンパク質発現系として用いられる。FGF-7多角体を発現する絹糸腺をカイコから摘出しテグスに加工した。このFGF-7多角体含有テグスを用いて、表皮モデルを作製できることがわかっている。FGF-7多角体含有テグスを用いて作製した表皮モデルが、皮膚刺激性試験に用いられる動物モデルの代替物として有用であるかどうかを検討するため、50%効果濃度を測定した。その結果、モデルとして強いバリア機能を有していることが示された。また、 FGF-7を繭糸のセリシン層に分泌する遺伝子組換えカイコを作出した。FGF-7含有セリシン繭を粉末状に加工したFGF-7含有セリシン粉末は、FGF-7を21日以上放出し続け、さらにケラチノサイトの増殖を促した。長期間FGF-7を放出し続ける性質を活かし、FGF-7含有セリシン粉末を用いて16日間の培養が必要な表皮モデルの作製を試みた。作製したモデルを凍結切片に加工し、免疫染色で調べた結果、表皮の各層の分化マーカーを発現していた。よって、ケラチノサイトの層は表皮様に分化していたことがわかった。以上の結果からセリシンは、長期間に渡りFGF-7の活性を保護し、さらに細胞外マトリクス様の働きとしてFGF-7を徐放できることや、表皮モデル構築に利用できることも明らかにした。

Fibroblast growth factor 7 (FGF - 7) polygonal body を as るカイコの silk si gland から cropping したテグスを with いて epidermis モデルを constructing し, モデルとしての usefulness を beg し検た. Polyhedrons とウ and insects ウ <s:1> スがスがスがスがスが produce するタパパ granular microcrystals である. この crystallization のに arbitrarily のタンパク qualitative を embedding することができ, embedding されたタンパク qualitative は settle に bartender たれ, less しずつ release される. This study ではケラチノサイト cells raised colonization factor である FGF - 7 をに embedding し polygonal body, silk si gland で発 now する heritage 伝 subgroups in えカイコを make した. Silk は si glands, cocoon タンパク qualitative を発 now する tissue で group in えタンパク qualitative 発 now is として in いられる. FGF-7 polyhedrons を occurrence する silk glands をカコらら extraction テグスに processing たた. この FGF - 7 polygonal body contains テグスを with いて, skin モデルを cropping できることがわかっている. FGF - 7 polygonal body contains テグスを with いて cropping した epidermis モデルが, skin irritation test に with いられる animal モデルの substitute として useful であるかどうかを beg す検るため, sharper 50% fruit concentration determination をした. その results, モデルとして strong いバリア function を have していることが shown された. また, FGF - 7 を cocoon si のセリシン layer に secretion する heritage 伝 subgroups in えカイコを make した. FGF - 7 contains セリシン cocoon を powder processing にした FGF - 7 contains セリシン powder は, FGF - more than 7 を 21 released し続け, さらにケラチノサイトの raised colonization を promote した. FGF - 7 を released between long-term し続ける nature を live かし, FGF - 7 contains セリシンを powder with いて 16 day の cultivate が necessary な epidermis モデルの cropping を try みた. Cropping したモデルを frozen section に processing し, immune dyeing でべたの results, skin layers の differentiation マーカーを発 now していた. Youdaoplaceholder0, ケラチノサトトト <s:1> layer <s:1> epidermo-like に differentiation <s:1> てたたたとがわとがわったった. の above results からセリシンは, long-term に cross between り FGF - 7 のをし protection, active さらに extracellular マトリクス others の働きとして FGF - 7 を Xu Fang できることや, skin モデル build に using できることも Ming らかにした.