核多角体病ウイルスの殺虫時間決定機構の解明

核型多角体病毒杀虫时间决定机制的阐明

• 批准号: 15J08419
• 负责人: 齋藤 康将
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Tokyo University of Agriculture and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-24 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15J08419/
• 关键词: 昆虫病理学; バキュロウイルス; 核多角体病ウイルス; チャノコカクモンハマキ; 殺虫時間; RNA-Seq

本研究課題は、殺虫時間の大きく異なる2つの核多角体病ウイルス(AdhoNPVとAdorNPV)を比較することで、核多角体病ウイルスにおける殺虫時間決定機構を解明することを目的としている。採用初年度においては、研究計画における以下の3つの研究を遂行した。『ウイルスの増殖速度の測定』ウイルス粒子を包埋する包埋体タンパク質遺伝子(polh)においてAdhoNPVとAdorNPVに共通なDNA配列を増幅するための定量-PCR用primerを作製した。本primerを用いた定量-PCRにより、ウイルス感染虫より経時的にウイルスDNAを検出した。その結果、殺虫時間の差が大きい条件下では殺虫時間が短いAdorNPVが殺虫時間の長いAdhoNPVよりもウイルス増殖速度が大きく、殺虫時間の差が小さい条件下では両ウイルスの増殖速度に差が見られないことが明らかとなった。『エクダイソンの不活化活性酵素の調査』ウイルスによる宿主のエクダイソン不活化活性酵素（EGT）の遺伝子発現およびタンパク質分泌を調査した。まず、AdhoNPVとAdorNPVのEGTにおいて共通する領域をターゲットとしたPCR用primerおよびペプチド抗体を作製した。本primerを用いたRT-PCRおよび本ペプチド抗体を用いたウエスタンブロッティングの結果、AdhoNPVとAdorNPVのEGTの遺伝子発現時期およびEGT分泌のタイミングには差が見られないことが明らかとなった。『トランスクリプトーム解析』次世代シーケンサーを用い、トランスクリプトーム解析（RNA-Seq）を行った。まず、AdhoNPVとAdorNPVに感染した宿主の遺伝子発現ライブラリを構築した。RNA-SeqによりAdhoNPVあるいはAdorNPVのORF発現を調査した結果、AdhoNPVとAdorNPVの全ORFの発現が確認された。さらに、Fisherの正確確率検定により、AdhoNPVあるいはAdorNPVにおいて特異的に発現量が高いORFが存在することが明らかとなった。

This study aims to compare the differences in insecticidal time between AdhoNPV and AdorNPV, and to clarify the mechanisms that determine insecticidal time. The following 3 studies were carried out using the initial year's research plan. "Measurement of the Growth Rate of DNA"- This primer is used for quantitative PCR to detect DNA when it is infected. The result is that the difference between the killing time and the growth rate of AdorNPV is greater than that between AdorNPV and AdhoNPV. "Regulation of the inactive enzyme of the host" Regulation of the protein secretion of the inactive enzyme of the host AdhoNPV and AdorNPV share a common domain, and PCR primers and antibodies are used to control it. It is clear that there are differences in the results of ESSTANBRITTEN sequencing using this primer for RT-PCR and this primer antibody, in the gene development periods of AdhoNPV and AdorNPV's EGT, and in the direct sequencing of EGT secretion. The next generation is called RNA-Seq. AdhoNPV and AdorNPV infect the host's DNA and construct the DNA. RNA-Seq was used to investigate the ORF development of AdhoNPV and the ORF development of AdhoNPV was confirmed. Fisher's accuracy rate is determined by AdhoNPV, AdorNPV, and specific ORFs.

项目成果

Comparison of viral growth characteristic of two nucleopolyhedroviruses isolated from the genus Adoxophyes

Adoxophyes属两种核多角体病毒的病毒生长特性比较

• 发表时间: 2015
• 作者: Yasumasa Saito;Yasuhisa Kunimi;Maki N. Inoue;Madoka Nakai
• 通讯作者: Madoka Nakai

チャノコカクモンハマキに感染する2種の核多角体病ウイルスの遺伝子発現の比較

感染 Chanokokakumonhamaki 的两种核多角体病毒的基因表达比较

• 发表时间: 2015
• 作者: Yasumasa Saito;Shizuo G. Kamita;Bruce D. Hammock;Yasuhisa Kunimi;Maki N. Inoue;Madoka Nakai;齋藤康将,石井一夫,古崎利紀,水谷哲也,大松勉,長井誠,国見裕久,井上真紀,仲井まどか;齋藤康将,石井一夫,古崎利紀,水谷哲也,大松勉,長井誠,国見裕久,井上真紀,仲井まどか
• 通讯作者: 齋藤康将,石井一夫,古崎利紀,水谷哲也,大松勉,長井誠,国見裕久,井上真紀,仲井まどか

Juvenile hormone (JH) esterase activity but not JH epoxide hydrolase activity is downregulated in larval Adoxophyes honmai following nucleopolyhedroviruses infection

核多角体病毒感染后，本米幼虫中保幼激素 (JH) 酯酶活性下调，但 JH 环氧化物水解酶活性不下调

• DOI: 10.1016/j.jinsphys.2015.02.005
• 发表时间: 2015
• 期刊: Journal of Insect Physiology
• 影响因子: 2.2
• 作者: Yasumasa Saito;Shizuo G. Kamita;Bruce D. Hammock;Yasuhisa Kunimi;Maki N. Inoue;Madoka Nakai
• 通讯作者: Madoka Nakai

核多角体病ウイルス感染チャノコカクモンハマキ幼虫におけるde novo transcriptomeライブラリの構築

核多角体病毒感染的青色幼虫从头转录组文库的构建

• 发表时间: 2016
• 作者: Yasumasa Saito;Shizuo G. Kamita;Bruce D. Hammock;Yasuhisa Kunimi;Maki N. Inoue;Madoka Nakai;齋藤康将,石井一夫,古崎利紀,水谷哲也,大松勉,長井誠,国見裕久,井上真紀,仲井まどか
• 通讯作者: 齋藤康将,石井一夫,古崎利紀,水谷哲也,大松勉,長井誠,国見裕久,井上真紀,仲井まどか