核多角体病ウイルスの宿主域決定機構の解析

核型多角体病毒宿主范围决定机制分析

• 批准号: 04J05964
• 负责人: 石川 裕規
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04J05964/
• 关键词: 核多角体病ウイルス; マイマイガ; 全タンパク質合成停止; 翻訳開始因子; HRF-1; eIF2; 酵母2-ハイブリッド法; RNAi; 宿主域決定機構; 抗ウイルス応答; eIF3a; Ld652Y細胞

マイマイガ由来のLd652Y細胞で増殖可能なLdMNPVのゲノムに特異的にコードされるHRF-1は、Ld652Y細胞で増殖不可能なAutographa californica MNPV (AcMNPV)の増殖を促進する因子として同定された。我々はこれまでに、HRF-1は、AcMNPVだけではなくNPV一般のLd652Y細胞における増殖に必須な因子であること、ならびにNPV感染により誘導される抗ウイルス応答である全タンパク質合成停止を排除することを示した。本研究では、HRF-1による全タンパク質合成停止排除の分子機構の理解を目的とし、HRF-1と相互作用する因子の探索を行なった。HRF-1の全長をbaitとした酵母two-hybrid法により、Ld652Y細胞のcDNAライブラリーから、HRF-1と結合する細胞因子を探索した。その結果、翻訳開始因子eIF3のサブユニット10(Ld-eIF3a)の部分cDNAを得た。RACE法によりLd-eIF3aの全長cDNAの塩基配列を決定したところ、Ld-eIF3aは1199アミノ酸からなり、他の生物種のeIF3aと高い相同性を示した。同定した全長Ld-eIF3aをHRF-1と共にLd652Y細胞で強制発現させ、免疫沈降を行った結果、Ld652Y細胞でHRF-1とLd-eIF3aとの結合が示された。そこで、Ld-eIF3aの翻訳開始での役割を知るため、RNAi法により、Ld-eIF3a発現を抑制したLd652Y細胞での翻訳活性を調べた。その結果、Ld-eIF3a発現を抑制したLd652Y細胞では、レポーター遺伝子EGFPの翻訳が著しく阻害された。以上の結果は、Ld-eIF3aがLd652Y細胞での翻訳に必須な役割を果たすことを示し、HRF-1がLd-eIF3aと相互作用することで翻訳開始のイベントに関わることを示唆する。

Ld652Y cell proliferation may be caused by factors specific to LdMNPV, but Ld652Y cell proliferation may not be caused by factors promoting proliferation of Autographa californica MNPV (AcMNPV). In response, HRF-1 and AcMNPV were found to be essential factors for NPV proliferation in Ld652Y cells. The purpose of this study is to explore the molecular mechanism of HRF-1 and HRF-1 interaction. The full-length of HRF-1 was baited by yeast two-hybrid method, and the cDNA expression of Ld652Y cells was explored. As a result, the partial cDNA of eIF3 (Ld-eIF3a) was obtained. The RACE method determines the nucleotide alignment of the full-length cDNA of Ld-eIF3a, and shows the high identity of Ld-eIF 3a in other species. At the same time, the full-length Ld-eIF3a and HRF-1 in Ld652Y cells were induced by stress, immune sedimentation, and binding of HRF-1 and Ld-eIF3a in Ld652Y cells. Ld652Y cells were stimulated by RNAi and Ld-eIF3a inhibition. As a result, Ld-eIF3a expression was inhibited in Ld652Y cells, and EGFP expression was inhibited. These results indicate that Ld-eIF3a and Ld652Y cells must undergo a process of transformation, and that HRF-1 and Ld-eIF3a interact to initiate a process of transformation.

项目成果

Host range factor 1 from Lymantria dispar nucleopolyhedrovirus (NPV) is an essential viral factor required for productive infection of NPVs in IPLB-Ld652Y cells derived from L-dispar

• DOI: 10.1128/jvi.78.22.12703-12708.2004
• 发表时间: 2004-11-01
• 期刊: JOURNAL OF VIROLOGY
• 影响因子: 5.4
• 作者: Ishikawa, H;Ikeda, M;Kobayashi, M
• 通讯作者: Kobayashi, M

A recombinant Bombyx mori nucleopolyhedrovirus possessing hrf-1 gene replicates in nonpermissive Lymantria dispar IPLB-Ld652Y cell line.

具有 hrf-1 基因的重组家蚕核多角体病毒在不允许的舞毒蛾 IPLB-Ld652Y 细胞系中复制。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Journal of Insect Biotechnology and Sericology 75(1)
• 作者: Ishikawa;H.;Ogasawara;T.;Ikeda;M.;Kobayashi;M.
• 通讯作者: M.

hycu-hr6, a large homologous region of Hyphantria cunea nucleopolyhedrovirus, is dispensable for virus replication in cell culture.

hycu-hr6 是美国白蛾核多角体病毒的一个大同源区域，对于细胞培养中的病毒复制来说是可有可无的。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Journal of Insect Biotechnology and Sericology 75(2) (in press)
• 作者: Nagai;S.;Felipe Alves;C.A.;Shirata;N.;Katou;Y.;Ishikawa;H.;Ikeda;M.;Kobayashi;M.
• 通讯作者: M.