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白色腐朽菌の代謝切り替えスイッチとしての水分活性センシング機構の解明

阐明白腐真菌代谢开关的水分活度传感机制

基本信息

批准号：
19J23714
负责人：
元田多一
金额：
$ 1.98万
依托单位：
University of Miyazaki
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-25 至 2022-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

沖縄のマングローブ林より単離された白色腐朽菌Phlebia sp. MG-60株は固相条件下では選択的な脱リグニンを行うが、液体培地では多糖分解酵素を分泌し糖質の分解と代謝を盛んに行う。この事から、白色腐朽菌における水分活性センシング機構に注目し、高浸透圧応答MAPK経路（HOG経路）に着目した。Phlebia sp. MG-60-P2株（Phlebia sp. MG-60株由来のプロトプラスト再生株）のHOG1様遺伝子（MGhog1）の全長配列を取得した。MGhog1の配列を基にMGhog1-RNAi コンストラクトおよび MGhog1 恒常発現コンストラクトを作製し、MGhog1発現抑制株 (KD株) および発現誘導株 (OE株) を作製した。コントロール（空ベクター導入株）と比較してKD株は、PDA培地（寒天培地）およびNaCl添加PDA培地上において生長が抑制される傾向が見られ、 OE株は、NaCl添加PDA培地上において生長が強く抑制される傾向が見られた。PDB培地（液体培地）で各菌株を培養したところ、コントロールと比較してKD株は生長が早く、OE株は生長が遅い傾向が見られ、菌糸の生長に比例してグルコースは消費され、培地中のエタノール濃度は上昇する傾向が見られた。振盪培養条件下 (160 rpm)では、KD株およびOE株の菌体生長速度はコントロールと変わらないが、KD株のエタノール発酵能はコントロールと比較して高い傾向が見られた。コントロールでは培養上清中に分裂子様異形細胞が確認されたが、OE株では分裂子様異形細胞は確認されず、KD株では培養上清中の分裂子様異形細胞数がコントロールと比較して多くなる傾向が見られた。これらの結果より、本菌のエタノール発酵、菌体生長および菌糸の形態形成はHOG経路を介して制御される可能性が示唆された。

Phlebia sp. MG-60 is a white rot fungus. Under solid phase conditions, it can be used for the secretion of polysaccharide decomposing enzymes and the metabolism of sugar. This phenomenon, white rot bacteria, water activity, mechanism, high osmotic pressure MAPK circuit (HOG circuit) are noted. The full-length sequence of the HOG1 gene (MGhog1) of Phlebia sp. MG-60-P2 strain was obtained. MGhog1-RNAi gene mutation and MGhog1 constant expression gene mutation are controlled by MGhog1 gene mutation, MGhog1 expression inhibitor (KD strain) and expression inducer (OE strain). In comparison with KD plants, PDA plants (cold days) and NaCl added PDA plants, the growth of KD plants was inhibited. In comparison with KD plants, PDA plants and NaCl added PDA plants, the growth of KD plants was inhibited. PDB culture (liquid culture) for each strain to culture, comparison, KD strain to grow early, OE strain to grow in the middle of the trend, bacteria growth ratio, culture in the concentration of the trend to increase Under shaking culture conditions (160 rpm), the growth rate of KD strain and OE strain was higher than that of KD strain. The number of mitogen-like cells in the culture supernatant of the OE strain was confirmed, the number of mitogen-like cells in the culture supernatant of the KD strain was confirmed, and the number of mitogen-like cells in the culture supernatant of the KD strain was similar to the number of mitogen-like cells in the culture supernatant. The results of this study showed that the possibility of cell fermentation, cell growth, and cell morphogenesis and HOG pathway control was also discussed.