Notch受容体の細胞表面における活性化調節機構

细胞表面Notch受体的激活调控机制

• 批准号: 19K07374
• 负责人: 北川 元生
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: International University of Health and Welfare
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K07374/
• 关键词: Notchシグナル; TM2D3; TM2D1; TM2D2; ノックアウトマウス; アルツハイマー病; 細胞表面受容体; 細胞内シグナル伝達

TM2D3のN側の細胞外ドメイン全長（102残基）を6 × His融合タンパク質（組換え型TM2D3タンパク質）として大腸菌を用いて発現した。このタンパク質のrefoldingを試みたところ、非還元状態で二量体および三量体を形成することを見いだした。これらの複合体は還元状態にしても部分的にしか崩壊しないことから、安定なものであることが示唆された。この組換え型TM2D3タンパク質を抗原としてウサギポリクローナル抗体を作製した。この抗体を用いてWestern blottingをおこなったところ、組換え型TM2D3タンパク質二量体および三量体は1 ngのオーダーに至るまで良好に検出されたが、単量体の検出には10倍量のタンパク質を必要とした。野生型マウス由来の初代培養線維芽細胞の溶解液を、Tm2d3ノックアウトマウス由来細胞の溶解液をコントロールとして同様の解析を行ったところ、両者のバンドのパターンに変化が見られなかったことから、この抗体では内因性Tm2d3タンパク質の検出は難しいと考えられた。NOTCH1とTM2D3の物理的会合を検討するため、NOTCH1を過剰発現させた293T細胞の溶解液と組換え型TM2D3タンパク質をincubateし、上記抗体とprotein G sepharoseを用いてTM2D3を回収したが、NOTCH1のpull downは検出されなかった。TM2D3と類似した構造を持つタンパク質であるTM2D1とTM2D2について、N側の細胞外ドメイン全長の大腸菌を用いた発現を試み、81残基からなるTM2D1、N端が異なる2つのalternative splicing variantが知られているTM2D2については112残基からなるTM2D2v1と86残基からなるTM2D2v2それぞれを6 × His融合タンパク質として発現することに成功した。

TM2D3 の N side の extracellular ド メ イ ン length (102 residues) を 6 x ihs fusion タ ン パ ク mass type (group in え TM2D3 タ ン パ ク qualitative) と し て coliform を with い て 発 now し た. こ の タ ン パ ク qualitative の refolding を try み た と こ ろ, the state also yuan で quantity body お よ び を three quantity body formation す る こ と を see い だ し た. こ れ ら の complex は also yuan state に し て も part of に し か collapse 壊 し な い こ と か ら, stable な も の で あ る こ と が in stopping さ れ た. Type こ の group in え TM2D3 タ ン パ ク qualitative を antigen と し て ウ サ ギ ポ リ ク ロ ー ナ ル antibody を cropping し た. を こ の antibody with い て Western blotting を お こ な っ た と こ ろ type, group in え TM2D3 タ ン パ ク quality 2 quantity body お よ び three quantity body は 1 ng の オ ー ダ ー に to る ま で good に 検 out さ れ た が, 単 quantity body の 検 out に は 10 times the amount of の タ ン パ ク qualitative を necessary と し た. Wild type マ ウ ス origin の original の culture line d bud cells dissolved liquid を, Tm2d3 ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス origin cells の dissolved liquid を コ ン ト ロ ー ル と し て with others in line analytical を の っ た と こ ろ, struck の バ ン ド の パ タ ー ン に variations change が see ら れ な か っ た こ と か ら, こ の antibody で は endogenous Tm2d3 タ ン パ ク qualitative の 検 は difficult Youdaoplaceholder5 と tests えられた. NOTCH1 と TM2D3 の meet physical を beg す 検 る た め, NOTCH1 を before turning 発 now さ せ た 293 t cells の dissolved liquid type と group in え TM2D3 タ ン パ ク qualitative を incubate し, written antibody と protein G sepharoseを uses the を てTM2D3を to return the <s:1> たが and NOTCH1 pulls down the されな 検 to get the されな たが った. TM2D3 と similar し た tectonic を hold つ タ ン パ ク qualitative で あ る TM2D1 と TM2D2 に つ い て, N side の extracellular ド メ イ ン span の coliform を with い た 発 を み, now 81 residues か ら な る TM2D1, n-terminal が different な る 2 つ の the alternative splicing Know the variant が ら れ て い る TM2D2 に つ い て は 112 residues か ら な る TM2D2v1 と 86 residues か ら な る TM2D2v2 そ れ ぞ れ を 6 x ihs fusion タ ン パ ク qualitative と し て 発 now す る こ と に success し た.

项目成果

Notchシグナルの調節因子TM2D3の機能

Notch信号调节器TM2D3的功能

• 发表时间: 2020
• 期刊: 国際医療福祉大学学会誌
• 作者: 北川元生;板橋匠美;梅宮敏文;増田渉;安島理恵子;相賀裕美子
• 通讯作者: 相賀裕美子

マウスTm2d3遺伝子は劣性致死性遺伝子である

小鼠Tm2d3基因是隐性致死基因

• 发表时间: 2022
• 期刊: 医学検査
• 作者: 板橋匠美;北川元生;増田渉;安島理恵子;相賀裕美子;梅宮敏文
• 通讯作者: 梅宮敏文

Involvement of Transmembrane 2 domain containing 3 (TM2D3) into Notch signaling in vitro and in vivo

含有跨膜 2 结构域 3 (TM2D3) 的体外和体内参与 Notch 信号传导

• 发表时间: 2022
• 作者: Wang C;Horigane SI;Wakamori M;Ueda S;Kawabata T;Fujii H;Kushima I;Kimura H;Ishizuka K;Nakamura Y;Iwayama Y;Ikeda M;Iwata N;Okada T;Aleksic B;Mori D;Yoshida T;Bito H;Yoshikawa T;Takemoto-Kimura S;Ozaki N;網代将彦;Motoo Kitagawa
• 通讯作者: Motoo Kitagawa

Transmembrane 2 domain containing 3 (TM2D3) regulates presentation of Notch receptors on the cell surface

含有 3 (TM2D3) 的跨膜 2 结构域调节细胞表面 Notch 受体的呈递

• 发表时间: 2020
• 作者: Wataru Masuda;Tomoko Yamakawa;Rieko Ajima;Katsuya Miyake;Takumi Itabashi;Toshifumi Umemiya;Kazuhiko Azuma;Jun-ichi Tamaru;Makoto Kiso;Puspa Das;Yumiko Saga;Kenji Matsuno;Motoo Kitagawa
• 通讯作者: Motoo Kitagawa

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