安定同位体標識アミノ酸を用いた質量分析計による薬剤耐性菌検出法の確立

稳定同位素标记氨基酸质谱耐药菌检测方法的建立

• 批准号: 19K08927
• 负责人: 渡 智久
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Kameda University of Health Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K08927/
• 关键词: MALDI-TOF MS; SILAC; 薬剤耐性菌

近年提唱されている安定同位体標識法を前処理に利用するSILAC法は、抗菌薬原末の使用による煩雑な操作や薬剤耐性の判定が目視であることに課題がみられ、臨床現場での実用化に至っていない。本研究では、①SILAC法に薬剤ディスクを使用して簡便化を図ること,②SILAC法で処理した臨床由来の薬剤耐性株のマススペクトルをリファレンスライブラリーに登録することの2つによって、薬剤耐性菌の検出の自動判定を可能にすることを目的としている。臨床分離株の測定では、MSSA株を高率に識別できるが、MRSA株の判定能が低確率であるという課題が残されていたため、解析方法の変更を検討することとした。当初のMRSAのマススペクトルのリファレンスライブラリーへの登録による自動判定を中止し、ブルカー社のCliniProtools 3.0を使用し、薬剤耐性菌の判定法を確立できるかを検討することとした。培養液①Normal（通常のアミノ酸含有培地）、培養液②Heavy（安定同位体含有培地）、培養液③Heavy（安定同位体含有培地）＋薬剤ディスクの3種類の培養液で処理したMRSAのマススペクトルをCliniProtools 3.0のGenetic Algorithm（GA）、Supervised Neural Network（SNN）およびQuick Classifier（QC）の各統計処理によってクラスタリングを行ったが、培養液①と培養液②のマススペクトルはMSSAとMRSAでは大きな相違がみられないため、培養液③についてのみMSSAとMRSAをクラスタリングし、unknownなS. aureusがMSSAとMRSAのどちらに分類されるかを検討すれば良いということが判明した。

In recent years, SILAC method has been used in pretreatment of stable isotope identification method, such as visual inspection, clinical application of antibacterial agents, operation and drug resistance determination. The purpose of this study is to simplify the use of SILAC method, to process the selection of resistant strains from clinical origin, and to automatically determine the presence of resistant strains. Clinical isolate determination, MSSA strain identification, MRSA strain identification, low accuracy, residual, analytical methods to improve the discussion The automatic determination of MRSA's entry in the database was suspended, and the use of CliniProtocols 3.0 and the determination of MRSA's resistant bacteria were established. Medium ①Normal (Usually the acid contains culture medium), culture medium ②Heavy (Diazepam isotope contains culture medium), culture medium ③Heavy Genetic Algorithm (GA), Supervised Neural Network (SNN), and Quick Classifier (QC) of CliniProtocols 3.0 Culture medium ① culture medium ② culture medium ③ culture Aureus is MSSA and MRSA.

项目成果

安定同位体標識アミノ酸を用いた質量分析計による MRSAの検出に関する研究

使用稳定同位素标记氨基酸的质谱仪检测 MRSA 的研究

• 发表时间: 2023
• 作者: 秀川智春;國下洋輔;吉見竜介;櫻井菜月;三橋正季;杉山裕美子;岸本大河;飯塚友紀;小宮孝章;永井秀人;濱田直樹;土田奈緒美;副島裕太郎;神山玲光;小林幸司;浅見由希子;桐野洋平;矢嶋宣幸;佐田憲映;一瀬邦弘;大野滋;中島秀明;佐藤 真央
• 通讯作者: 佐藤 真央