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Investigation of mechanisms of neuropathic pain using compartment culture

使用隔室培养研究神经性疼痛的机制

基本信息

批准号：
19K09379
负责人：
柴崎雅志
金额：
$ 2.41万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

Campenot chamberを用いたin vitro神経障害性疼痛モデルにより、２つの軸索コンパートメントのうち、一方の軸索コンパートメントの軸索を傷害させることにより、他方の軸索コンパートメントにおいて発現量の変化するタンパク質を検出することが研究の目的であった。しかしながら、これまでの調査によりSDS-PAGEを行っても特異的なバンドは認められなかった。SDS-PAGEによる特異的なバンドが検出できれば、脊髄を用いた免疫組織染色および脾臓由来単球系細胞を用いた化学遊走能を調査することにより神経障害性疼痛に関与するタンパク質を同定する予定であった。そこで文献的調査により標的タンパク質を予め決め、脾臓細胞から磁気細胞選別により抽出したCD11b陽性細胞を用いた化学遊走能を調査することで神経障害性疼痛に関与する可能性のある標的タンパク質を絞る研究を実施することにした。1. 脾臓由来細胞のうち、CD11b陽性細胞がどの程度存在するかを脾臓由来細胞を培養し、免疫細胞染色により調査する。2. 次に脾臓由来細胞を磁気細胞選別によりCD11b陽性細胞のみを抽出する。3. 抽出したCD11b陽性細胞を用い、予め文献的に調査した標的タンパク質を用いた化学遊走能を評価する。4. 化学遊走能の評価に基づき、神経障害性疼痛に関与する可能性のあるタンパク質をマウスに投与し、疼痛閾値の評価を行う。5. 神経障害性疼痛に関与する可能性のあるタンパク質を薬理学的に中和することによる疼痛閾値の評価を行う。

Campenot chamber is used in vitro neuropathic pain, and the purpose of this study is to detect the occurrence and quality of damage to one or the other of the axons. SDS-PAGE was used to investigate the differences between the two groups. SDS-PAGE was used to detect specific neuropathic pain, spinal cord injury, immunohistochemical staining, and spleen-derived cell lines, and to investigate the relationship between neuropathic pain and spinal cord injury. In this paper, we investigate the relationship between neuropathic pain and the possibility of studying the quality of spleen cells, magnetic cells, CD11b positive cells, and neuropathic pain. 1. The existence of CD11b positive cells in spleen-derived cells was investigated by culture of spleen-derived cells and immunocyte staining. 2. The second is the selection of CD11b-positive cells from spleen cells. 3. CD11b-positive cells were isolated and evaluated for their chemical mobility. 4. Chemical mobility assessment, neuropathic pain assessment, probability assessment, quality assessment, pain threshold assessment 5. Neuropathic pain is associated with the possibility of neuropathic pain and the evaluation of neuropathic pain thresholds.