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STORM顕微鏡を用いた有毛細胞シナプスにおけるOtoferlinの構造機能解析

使用 STORM 显微镜对毛细胞突触中的 Otoferlin 进行结构和功能分析

基本信息

批准号：
19K09880
负责人：
鷹合秀輝
金额：
$ 2.75万
依托单位：
National Rehabilitation Center for Persons with Disabilities
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

内有毛細胞と蝸牛神経を繋ぐ求心性シナプス（内有毛細胞リボンシナプス）において神経伝達物質としてグルタミン酸が用いられており、この部位の障害によりオーディトリーニューロパチーが引き起こされる。本研究では電気生理学的手法であるパッチクランプ法に光学的手法である超解像イメージングとグルタミン酸イメージングを組み合わせ、OtoferlinをコードするOTOFの遺伝子変異による難聴の病態解明を目指す。以下に令和4年度の研究実績を記す。(1) グルタミン酸イメージングによる機能解析内有毛細胞リボンシナプスにおけるグルタミン酸放出を測定するための新規ツールとして蛍光グルタミン酸プローブを用いているが、内有毛細胞との結合能が高くないため、秒単位の時間分解能しか得られていない。令和2-3年度に内有毛細胞と同様のリボンシナプス構造を有する網膜双極細胞を用いてリボンシナプス用にプローブをカスタマイズし、ミリ秒単位でのグルタミン酸放出の時空間動態の解析を可能とした。令和4年度は、キンギョ網膜双極細胞軸索終末部を対象としてCtBP/Ribeye結合ペプチドによりリボンを標識した上で、蛍光カルシウム色素によるカルシウムイメージング、蛍光グルタミン酸色素によるグルタミン酸イメージングの同時記録を実現し、神経伝達の鍵となるカルシウム流入とグルタミン酸放出の時空間動態をリボンとの距離と関連付けながら解析することを可能とした。このような状況の中、野生型マウス蝸牛から単離した内有毛細胞を対象としてグルタミン酸イメージングを試みているが、満足のいく結果には至っていない。(2) 免疫染色法による構造解析令和4年度は論文投稿に向けて上記イメージング実験に注力したため、免疫染色法による構造解析を実施し得なかった。

内有毛細胞と蝸牛神経を繋ぐ求心性シナプス（内有毛細胞リボンシナプス）において神経伝達物質としてグルタミン酸が用いられており、この部位の障害によりオーディトリーニューロパチーが引き起こされる。本研究幽门螺杆菌生理学的方法阿托伐他汀法治疗光学的方法阿托伐他汀超解像阿托伐他汀类抗生素类抗生素。以下に令和4年度の研究実績を記す。(1)荧光素酶抑制剂能够解析内有毛细胞色素氧化酶的磷酸化产物，并能将其释放出来，形成新的荧光素酶抑制剂，利用荧光素酶抑制剂，内有毛细胞色素氧化酶结合能提高荧光素酶活性，次级定位荧光素酶分解能获得荧光素酶抑制剂。令和2-3年内有毛细胞同样增殖并增殖，造有毛细胞双膜瘤细胞利用骨肉瘤细胞增殖抑制作用，利用骨肉瘤细胞增殖抑制剂诱导肿瘤细胞凋亡，并在第二次原位杂交后，将肿瘤细胞内的酸性磷酸盐释放出来，分析可能发生的恶性肿瘤。令和4年度报告，荧光素酶抑制膜双链胞浆细胞搜索终末部分特征标记物，CtBP/Ribeye复合酶抑制剂申请表上的标记物，荧光素酶抑制剂色素酶抑制剂，荧光素酶抑制剂色素酶抑制剂色素酶抑制剂，荧光素酶抑制剂色素酶抑制剂色素酶抑制剂，神少子，神少このような状況の中、野生型マウス蝸牛から単離した内有毛細胞を対象としてグルタミン酸イメージングを試みているが、満足のいく結果には至っていない。(2)免疫色素法染色染料制造解除解析令和4年度论文投稿向上级主管机关提交了染色染料制造解除解析负担。

项目成果

期刊论文数量（10）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

網膜双極細胞リボンシナプスにおけるグルタミン酸放出の可視化

视网膜双极细胞带状突触谷氨酸释放的可视化

DOI：
发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
0
作者：
大島知子;坂本寛和;並木繁行;廣瀬謙造;立花政夫;鷹合秀輝
通讯作者：
鷹合秀輝

Spatiotemporal dynamics of glutamate release from individual ribbon and non-ribbon regions in the goldfish retinal bipolar cell terminal.

金鱼视网膜双极细胞终端单个带状和非带状区域谷氨酸释放的时空动态。

DOI：
发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
0
作者：
Tomoko Oshima-Takago;Hirokazu Sakamoto;Yukihiro Nakamura;Shigeyuki Namiki;Kenzo Hirose;Masao Tachibana;Hideki Takago
通讯作者：
Hideki Takago

Unveiling glutamate release sites at the ribbon-type synapses in the goldfish retinal bipolar cell terminal

揭示金鱼视网膜双极细胞末端带状突触的谷氨酸释放位点

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
Tomoko Oshima-Takago;Hirokazu Sakamoto;Yukihiro Nakamura;Shigeyuki Namiki;Kenzo Hirose;Masao Tachibana;Hideki Takago
通讯作者：
Hideki Takago

Novel imaging of glutamate release from the ribbon type synapses of goldfish retinal bipolar cell terminal

金鱼视网膜双极细胞末端带状突触谷氨酸释放的新成像