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Ｂｔ毒素の進化を模倣した、殺虫タンパク質の人為的改変

人工修饰杀虫蛋白以模仿 Bt 毒素的进化

基本信息

批准号：
17J01066
负责人：
阿出川さとみ
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2017
资助国家：
日本
起止时间：
2017-04-26 至 2020-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

1.Bt毒素新規受容体探索系の改良：Cry1Aaの受容体カドヘリン様タンパク質を初めて、また高いLC-MS/MSスコアで検出できた。これは今までで一番Cry1Aa毒素に結合する膜タンパク質を高濃度に濃縮できたことを意味していたが、それでもABC transporter C2 (ABCC2) は検出できなかった。ABCC2がカイコガ中腸においてカドヘリン様タンパク質よりさらに10倍低い発現量を示すためだと考えられ、より高濃度にABCC2を濃縮する手法が必要だと分かった。2.Bt毒素の潜在的なABC transporter利用能力：カイコガ中腸に発現する55種類のABC transporter のうち、6種類のABC transporterとカイコガを殺せる5種類のBt毒素を題材に、Bt毒素が受容体として利用できるABC transporterがどれほどあるかを解析した。その結果、1種類のBt毒素がその強弱はありながらも複数のABC transporterを受容体として利用できることが示された。3.ABCC2との結合に重要なBt毒素上のアミノ酸残基の解析：カイコガのABCC2 (BmABCC2) に対する結合親和性が低いCry1DaとCry9Daにおいて、ドメインIIのループ2の根元の領域ごとBmABCC2を受容体として利用できるCry1Aaのものにすげ替えたところ、BmABCC2に対する結合親和性が向上した。これは異なる毒素の種類を超えて、この領域がABCC2との結合に重要であることを意味しており、Bt毒素の人為的改変のための変異導入部位が明確となった。4.タンパク質工学の実施：前年度からさらに改良を重ねた実験条件で、Cry1Aa毒素の変異体ファージライブラリーを用いてBmABCC2に対してパニング選抜実験を試みたところ、数種類の変異体Cry1Aaが濃縮、すなわち選抜された。

The exploration of the new standard of 1.Bt toxin receptor is improved: the Cry1Aa receptor is in the early stage of the test, and the high level of the LC-MS/MS receptor is in the first place. Today, the combination of Cry1Aa toxins and the membrane shows that the temperature is very high, which means that the ABC transporter C2 (ABCC2) has a high temperature. In ABCC2, we need to know that it is necessary to measure 10 times lower than 10 times as low as possible, and to show that it is necessary to measure the height of the ABCC2. Potential ABC transporter utilization capacity of 2.Bt toxins: the potential ABC transporter utilization capacity of Bt toxins, such as 55 Bt toxins, 6 Bt toxins, 5 Bt toxins, and Bt toxins, the potential utilization capacity of Bt toxins. The results showed that 1 Bt toxins were strong and weak, and the number of copies was not detectable. The recipients of ABC transporter were detected by immunoassay. The analysis of the acid residues on the important Bt toxins: the analysis of the acid residues on the important Bt toxins: the combination of the ABCC2 (BmABCC2) and the low-level Cry1Da, the II-specific, the root-specific, the BmABCC2-specific, the Cry1Aa-specific, the BmABCC2-specific, and the sexual-positive. The combination of anti-toxins and ABCC2 drugs in the field means that the import sites of anti-toxins and Bt toxins can be clearly detected. 4. In the previous year, it was necessary to improve the conditions in the previous year. Cry1Aa toxins were used to improve the conditions of the industry. In the previous year, the Cry1Aa toxins were used to improve the quality of the products. In the previous year, the BmABCC2 system was used to improve the quality of the system.

项目成果

期刊论文数量（14）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Receptor analysis of Cry1Ca toxin expressed on Sf9 cells, oral presentation

Sf9 细胞上表达的 Cry1Ca 毒素的受体分析，口服介绍

DOI：
发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
0
作者：
Endo;H.;Tanaka;S.;Imamura;K.;Adegawa;S.;Kikuta;S. & Sato;R.;阿出川　さとみ;○Adegawa Satomi & Sato Ryoichi
通讯作者：
○Adegawa Satomi & Sato Ryoichi

カイコ ABC トランスポーターの細胞外ループ構造は Cry 毒素に対する感受性を決定する

家蚕ABC转运蛋白的细胞外环结构决定对Cry毒素的敏感性