細胞間超微細分子反応のｉｎ　ｖｉｔｒｏ迅速測定方法の開発

细胞间超细分子反应体外快速测定方法的开发

• 批准号: 24650264
• 负责人: 渡辺 理江
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012-04-01 至 2013-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-24650264/
• 关键词: マイクロ・ナノデバイス; 分子輸送; 抗原抗体反応

細胞間超微細分子反応のin vitro迅速測定方法の開発として、生体分子モーターシステムである in vitro キネシン-微小管輸送システムに注目した。新規迅速測定方法として使用されるデバイス内分子検出部での特定分子輸送系の構築のため、H24年度は、分子構築系として評価し易いFlow cell流路を用い輸送系構築を試みた。輸送の搭載分子モデルとしては安価なBovine Serum Albumin (BSA)を使用し、その抗原－抗体反応（BSA-抗BSA抗体の結合反応）を利用した分子輸送系を設計した。BSA-抗BSA抗体と輸送体となる微小管への結合は、ストレプトアビジン‐ビオチン結合を利用した。輸送される分子の検出は、輸送分子に直接結合させた蛍光分子Alexa 488やTAMRAの蛍光強度により高感度に評価された。微小管で輸送されるBSA分子は、分子レベルで高感度に微量検出することができ、特定分子輸送システムの構築に成功した。がしかし、運搬される分子の高感度検出には成功したものの、輸送中の各分子同士の立体障害・結合凝集反応、微小管上へのBSA-抗BSA抗体の搭載効率の低下や微小管の運搬速度が大きく下がる、といった問題が起こり、これら問題点を解決するような高感度合成小分子を用いた新規分子輸送システムの開発を今後の検討課題としたい。

Development of a method for rapid measurement of intracellular ultrafine molecular reactions in vitro, and in vivo molecular transport The new rapid measurement method is used to construct a specific molecular transport system in the molecular detection part of the H24. The molecular construction system is evaluated and used to construct a transport system in the Flow cell flow path. Design of molecular delivery system for use of antigen-antibody conjugate (BSA-anti-BSA antibody conjugate) BSA-anti-BSA antibody and transporter binding to microtubule The transport molecule is directly bound to the fluorescent molecule Alexa 488 and the fluorescent intensity is evaluated as high sensitivity. The construction of a micro-tube transport system for BSA molecules with high sensitivity was successful. The high sensitivity detection of molecules in the transport system has been successfully carried out. The steric barrier of each molecule in the transport system, the binding aggregation reaction, the low loading efficiency of BSA-anti-BSA antibody on microtubes, and the high transport speed of microtubes have been discussed in the future.