Development of novel protein production system using peptide-tag derived from Bacillus thuringiensis Cry toxin.

使用苏云金芽孢杆菌 Cry 毒素衍生的肽标签开发新型蛋白质生产系统。

• 批准号: 23658048
• 负责人: HAYAKAWA Tohru
• 金额: $ 2.16万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2013
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-23658048/
• 关键词: Bacillus thuringiensis; Cry4Aa; 大腸菌; ペプチドタグ4AaCter; シスタチンC; サソリトキシン; タンパク質生産システム; ペプチドタグ; 4AaCter; サソリ毒; タンパク質生産; 凝集体形成; フェリチン; 発現ベクター; Cryトキシン

4AaCter and 4AaB7 are peptide-tags derived from mosquitocidal Cry4Aa toxin. These peptide-tags facilitate inclusion formation of fused protein in Escherichia coli. In this study, the ability of 4AaCter and 4AaB7 to from protein inclusion were analyzed. Mutational analyses revealed that the hydrophobic amino acids in 4AaB7 significantly affected the formation of protein inclusion, suggesting some important roles of these hydrophobic amino acid residues. Application of 4AaCter-tag to the production of cystatin C as an endogenous marker of renal dysfunction yielded excellent results, including a dramatic increase in the production level, simplification of the product purification and high immunogenicity. Similarly, scorpion toxins were produced well as alkali-soluble protein inclusion in E. coli, and shown to be a good supplements for Cry toxin-based bioinsecticides.

4AaCter和4AaB7是由杀蚊剂Cry4Aa毒素衍生的肽标签。这些肽标签促进大肠杆菌中融合蛋白的包涵形成。本研究分析了4AaCter和4AaB7对蛋白包涵的能力。突变分析表明，4AaB7中的疏水氨基酸显著影响了蛋白质包涵体的形成，提示这些疏水氨基酸残基具有重要的作用。将4AaCter-tag应用于胱抑素C作为内源性肾功能标志物的生产，取得了显著提高生产水平、简化产品纯化、高免疫原性等良好效果。同样，蝎子毒素在大肠杆菌中也能以碱溶性蛋白的形式产生，并被证明是基于毒素的生物杀虫剂的良好补充。

项目成果

大腸菌を用いて殺蚊トキシンCry11Aa を効率的に生産する方法

一种利用大肠杆菌高效生产杀蚊毒素Cry11Aa的方法

• 发表时间: 2013
• 作者: 早川徹;佐野乙香;井出徹
• 通讯作者: 井出徹

Bt菌B0462株に由来する新規パラスポリン（PS1Ac2）の解析

源自 Bt 细菌 B0462 菌株的新型副孢菌素 (PS1Ac2) 分析

• 作者: 早川徹;黒田将太;Begum A;佐賀瑞恵;平尾彬奈;水城英一;酒井裕
• 通讯作者: 酒井裕

殺蚊トキシンCry4Aaに由来するペプチドタグの開発と検査薬成分(抗原タンパク質)の効率的生産

开发源自杀蚊毒素 Cry4Aa 的肽标签并高效生产测试药物成分（抗原蛋白）

• 发表时间: 2012
• 作者: 早川徹;林雅浩;高木麻里;佐藤真也;岩本繁久;須藤薫雄;酒井裕
• 通讯作者: 酒井裕

BT 菌に由来するポリペプチドタグを利用した検査薬成分(抗原タンパク質)の効率的生産

使用源自 BT 细菌的多肽标签高效生产测试药物成分（抗原蛋白）

• 发表时间: 2011
• 作者: 林雅浩;高木麻里;山崎貴郁;山西勇輝;佐藤真也;岩本繁久;須藤薫雄;早川徹;酒井裕
• 通讯作者: 酒井裕

BT菌に由来するポリペプチドタグを利用した検査薬成分(抗原タンパク質)の効率的生産

使用源自 BT 细菌的多肽标签高效生产测试药物成分（抗原蛋白）

• 发表时间: 2011
• 作者: 林雅浩;高木麻里;山崎貴郁;山西勇輝;佐藤真也;岩本繁久;須藤薫雄;早川徹;酒井裕
• 通讯作者: 酒井裕