Th17分化障害、自己免疫疾患に着目したSTAT1機能獲得型変異の病態解明

阐明 STAT1 功能获得性突变的发病机制，重点关注 Th17 分化障碍和自身免疫性疾病

• 批准号: 21K15865
• 负责人: 坂田 園子
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K15865/
• 关键词: STAT1機能獲得型変異（STAT1-GOF）; Th17細胞; サイトカイン; I型インターフェロノパチー; STAT1機能獲得型変異; 慢性皮膚粘膜カンジダ症; Th17分化障害

・STAT1機能獲得型変異（STAT1-GOF）患者におけるTh17細胞減少の分子基盤の解明を目的として、以下の基礎実験を行った。健常者およびSTAT1-GOF患者由来のナイーブT細胞を磁気ビーズで純化し、Th17細胞への分化条件のもとで培養する。その後、IL-17A, IL-17F, IL-22産生細胞の割合をフローサイトメトリーで解析し、Th17細胞への分化状況を評価する。並行して、上清中のIL-17A, IL-17FをCBA法で測定し、分化誘導で得られたTh17細胞から分泌されるサイトカインを評価する。上記のTh17細胞の分化条件に、IFN-α, IFN-γ, IL-27を添加し、患者でTh17細胞の分化・増殖が過剰に抑制されるか検討する。並行して、各サイトカインに対する中和抗体（抗IFN-α抗体、抗IFN-γ抗体、抗IL-27抗体）を加え、Th17細胞の分化・増殖が回復するか検討する。また、複数抗体のカクテル、JAK阻害薬（STAT1の機能を抑制）存在下での培養も行う。前年度から継続して、症例数を増やしながら上記実験を行っている。・I型インターフェロノパチーに着目した自己免疫疾患の分子基盤の解明を目的として、以下の実験を前年度から継続して行った。末梢血単核球での特定の5遺伝子（IFI27, IFIT1, MX1, IFI44L, RSAD2）、IFN-αで誘導される遺伝子群、炎症性サイトカイン、ケモカインを含む計139の遺伝子群の発現状態をターゲットRNA-seqで測定する。健常者、STAT1-GOF患者、Aicardi-Goutieres症候群患者の末梢血単核球を対象とする。それによりI型インターフェロノパチーの指標となるIFN signatureの有無を評価する。

·STAT1-GOF patients with Th17 cell loss are targeted for understanding the molecular basis of STAT1-GOF. Healthy and STAT1-GOF patient-derived T cells were purified and Th17 cells were cultured under different conditions. The analysis of IL-17A, IL-17F and IL-22-producing cells and the differentiation of Th17 cells were evaluated. IL-17A and IL-17F in the supernatant were measured by CBA method, and differentiation induction was evaluated by secretion of Th17 cells. The differentiation conditions of Th17 cells described above, IFN-α, IFN-γ, IL-27 addition, patient differentiation and proliferation of Th17 cells were inhibited. In parallel, neutralizing antibodies (anti-IFN-α antibody, anti-IFN-γ antibody, anti-IL-27 antibody) were added to each cell, and differentiation and proliferation of Th17 cells were discussed. Culture in the presence of multiple antibodies, JAK inhibitors (STAT1 function inhibition). In the previous year, the number of cases increased and the number of cases increased. The purpose of molecular basis analysis of type I immune diseases is to investigate the effects of different factors on immune function. 5 specific genes (IFI27, IFIT1, MX1, IFI 44L, RSAD2), IFN-α induced genes, inflammatory genes, and RNA-seq were detected in peripheral blood lymphocytes, including 139 genes. Peripheral blood corpuscles in healthy individuals, STAT1-GOF patients, and patients with Aicardi-Goutieres syndrome The presence or absence of IFN signature can be evaluated as an indicator of type I IFN activity.