Elucidation of a novel mechanism of activating cellular immunity in psoriasis

2022年度は、pathogenic Th17細胞(MCAM+CD161- Th17細胞)に発現するCD83がCD8+T細胞に及ぼす影響についてさらなる検討を行った。昨年度実施した共培養実験において、Th17前駆細胞(CCR6+CD4+T細胞)の代わりにMCAM+CD161-Th17細胞をeffector memory CD8+T細胞と共培養した場合、より強力な細胞増殖活性化能、およびTc17細胞への誘導能を認めた。昨年度はCD8+T細胞の増殖活性化の指標として、hemocytometerを用いたCD8＋T細胞の細胞数を使用していたが、細胞数は細胞増殖と細胞死の結果であり、単独で使用する指標としては不適切であった。そのため、本年度ではCFSEやCellTraceVioletを使用したcell tracking assayによってさらにその結果を裏付けた。また、免疫細胞からのsCD83の分泌メカニズムが明らかになっていないため、ヒト単球系細胞株であるTHP-1細胞を用いてCD83 geneのsplicing variant解析を行った。THP-1細胞は樹状細胞へと成熟するとともに膜結合型CD83(mCD83)の発現およびsCD83の分泌が上昇するが、CD83 geneの膜貫通領域をコードするexon4を欠いたvariantであるCD83cは検出されなかった。この結果から、成熟樹状細胞からのsCD83の分泌はmCD83の膜表面からの脱落に起因すると考え、現在遺伝子組み換えCD83 vectorの構築を実施している。

2022年度は、pathogenic Th17細胞(MCAM+CD161- Th17細胞)に発現するCD83がCD8+T細胞に及ぼす影響についてさらなる検討を行った。昨年度実施した共培養実験において、Th17前駆細胞(CCR6+CD4+T細胞)の代わりにMCAM+CD161-Th17細胞をeffector memory CD8+T細胞と共培養した場合、より強力な細胞増殖活性化能、およびTc17細胞への誘導能を認めた。昨年度はCD8+T細胞の増殖活性化の指標として、hemocytometerを用いたCD8＋T細胞の細胞数を使用していたが、細胞数は細胞増殖と細胞死の結果であり、単独で使用する指標としては不適切であった。そのため、本年度ではCFSEやCellTraceVioletを使用したcell tracking assayによってさらにその結果を裏付けた。また、免疫細胞からのsCD83の分泌メカニズムが明らかになっていないため、ヒト単球系細胞株であるTHP-1細胞を用いてCD83 geneのsplicing variant解析を行った。THP-1細胞は樹状細胞へと成熟するとともに膜結合型CD83(mCD83)の発現およびsCD83の分泌が上昇するが、CD83 geneの膜貫通領域をコードするexon4を欠いたvariantであるCD83cは検出されなかった。この結果から、成熟樹状細胞からのsCD83の分泌はmCD83の膜表面からの脱落に起因すると考え、現在遺伝子組み換えCD83 vectorの構築を実施している。