肝類洞閉塞症候群における血小板活性化受容体CLEC-2の役割解明

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本研究のテーマである肝類洞閉塞症候群(SOS)は、化学・放射線療法の合併症で、肝類洞内皮細胞(LSEC)障害に引き続く循環障害性肝障害を特徴とする。CLEC-2は血小板のみならずLSECにも発現することから、これらの細胞に共通して発現するCLEC-2が、SOSの病態に何らかの形で関与しているという仮説をたてた。これまでの研究実績として、C57BL/6マウスにおけるSOSモデルとしてモノクロタリン投与モデルの作製を試みたが、安定したモデル作製が不可能であった。C57BL/6マウスについては、6-チオグアニンによるSOSモデルも試したものの、こちらも同様にモデルは不安定であった。このため、ICRマウスにストレインを変更することとし、まずICRマウスにおけるCLEC-2除去について検討を行った結果、同マウスにおいてCLEC-2除去は4週まで可能であることが判明した。令和4年度は、ICRマウスにおいて安定したSOSモデルマウスを作製することを試みた。まず少数例のICRマウスに対して400 mg/kgの投与を行ったところ、半数以上が48時間を待たず安楽死基準に到達したため、300mg/kgを投与量として設定した。また肝障害を生じる化学物質によりLSECがポドプラニンを発現するという知見が報告されていることから、ICRマウスにおけるSOSモデルにおいてLSECがポドプラニンを発現するかどうか免疫染色において検討を行っている。また肝臓における各種RNA発現についてはqPCRで評価する方針とし、PBSによる還流を行った後肝臓をペッスル型ホモジナイザーでホモジナイズしtRNA抽出、cDNAへの逆転写を行いアルブミンなどについてqPCRを行った。