肝類洞閉塞症候群における血小板活性化受容体CLEC-2の役割解明

阐明血小板活化受体 CLEC-2 在肝窦阻塞综合征中的作用

• 批准号: 21K16266
• 负责人: 大竹 志門
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Nihon University (2022)University of Yamanashi (2021)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16266/
• 关键词: 肝類洞閉塞症候群; CLEC-2; 血小板; ポドプラニン; Podoplanin; 類洞内皮細胞

本研究のテーマである肝類洞閉塞症候群(SOS)は、化学・放射線療法の合併症で、肝類洞内皮細胞(LSEC)障害に引き続く循環障害性肝障害を特徴とする。CLEC-2は血小板のみならずLSECにも発現することから、これらの細胞に共通して発現するCLEC-2が、SOSの病態に何らかの形で関与しているという仮説をたてた。これまでの研究実績として、C57BL/6マウスにおけるSOSモデルとしてモノクロタリン投与モデルの作製を試みたが、安定したモデル作製が不可能であった。C57BL/6マウスについては、6-チオグアニンによるSOSモデルも試したものの、こちらも同様にモデルは不安定であった。このため、ICRマウスにストレインを変更することとし、まずICRマウスにおけるCLEC-2除去について検討を行った結果、同マウスにおいてCLEC-2除去は4週まで可能であることが判明した。令和4年度は、ICRマウスにおいて安定したSOSモデルマウスを作製することを試みた。まず少数例のICRマウスに対して400 mg/kgの投与を行ったところ、半数以上が48時間を待たず安楽死基準に到達したため、300mg/kgを投与量として設定した。また肝障害を生じる化学物質によりLSECがポドプラニンを発現するという知見が報告されていることから、ICRマウスにおけるSOSモデルにおいてLSECがポドプラニンを発現するかどうか免疫染色において検討を行っている。また肝臓における各種RNA発現についてはqPCRで評価する方針とし、PBSによる還流を行った後肝臓をペッスル型ホモジナイザーでホモジナイズしtRNA抽出、cDNAへの逆転写を行いアルブミンなどについてqPCRを行った。

这项研究的主题是肝正正弦障碍综合征（SOS），是化学疗法的并发症，其特征是肝窦内皮细胞（LSEC）损伤后循环型肝脏疾病。由于CLEC-2不仅在血小板中而且在LSEC中表达，因此我们假设在这些细胞中通常表达的CLEC-2在某种程度上与SOS的病理有关。到目前为止，我们的研究结果试图创建一个单蛋白管理模型作为C57BL/6小鼠的SOS模型，但是不可能创建稳定的模型。对于C57BL/6小鼠，我们还尝试了使用6-硫代氨酸的SOS模型，但该模型也不稳定。因此，将菌株更改为ICR小鼠，并首先研究了ICR小鼠中CLEC-2的去除，发现在同一小鼠中可能可以在4周内去除CLEC-2。在2022年，我们试图在ICR小鼠中产生稳定的SOS模型小鼠。首先，以400 mg/kg的速度施用少量的ICR小鼠，并且由于超过一半的小鼠达到安乐死标准，而没有等待48小时，因此将300 mg/kg设置为剂量。此外，由于据报道，LSEC由于引起肝损伤的化学物质而表达podoplanin，因此已经研究了LSEC是否在ICR小鼠中SOS模型中的LSEC是否表达Podoplanin。此外，通过qPCR评估了肝脏中各种RNA的表达，并在PBS中回流后，将肝脏用杵型均质均质均质化，提取tRNA，逆转录到cDNA，然后在白蛋白和其他材料上进行qPCR。

项目成果

CLEC-2 promotes IGF-1 secretion from PDPN+ stromal cells and positively regulates erythropoiesis

CLEC-2促进PDPN基质细胞分泌IGF-1并正向调节红细胞生成

• 发表时间: 2021
• 作者: Shimon Otake;Tomoyuki Sasaki;Toshiaki Shirai;Nagaharu Tsukiji; Katsuhiro Takano;Shogo Tamura;Yukio Ozaki;Katsue Suzuki-Inoue
• 通讯作者: Katsue Suzuki-Inoue