iPS細胞由来巨核球が産生する血小板を活用したヒトCLEC-2の機能解析

使用 iPS 细胞衍生的巨核细胞产生的血小板对人 CLEC-2 进行功能分析

• 批准号: 22K08499
• 负责人: 大石 沙織
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: University of Yamanashi
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08499/
• 关键词: 血小板; CLEC-2

【背景】血小板活性化受容体CLEC-2は、マウスにおいては血栓の安定化、腫瘍の転移促進などに関わるが、生理的な止血への関与は少ない。そのため、CLEC-2の阻害が出血リスクの少ない抗血栓療法として期待されている。しかし、直接遺伝子改変ができないという血小板の特殊性から、ヒトでは良い研究ツールがなく、ヒトCLEC-2の機能は十分に解明されていない。【目的】本研究では、成熟後に血小板を生成できるヒトiPS細胞由来巨核球細胞株にゲノム編集を施すことで、CLEC-2欠損ヒト血小板を生成し、ヒトCLEC-2の止血・血栓形成への影響を解析することを目的とする。【方法・結果】成熟後に血小板を生成できるヒトiPS細胞由来巨核球細胞株を導入した。細胞培養から血小板生成までの過程を繰り返し行い、安定的に血小板を産生できる体制を整えた。産生した血小板におけるCLEC-2の発現をフローサイトメトリー法で解析し、ヒトから採血して得られた血小板と同様にCLEC-2が発現していること、リガンドであるロドサイチンで活性化することを確認した。

背景：血小板激活的受体CLEC-2参与稳定血栓并促进小鼠的肿瘤转移，但与生理止血无关。因此，预计CLEC-2的抑制作用是一种抗血栓疗法，出血风险较低。但是，由于血小板的独特性质无法直接改变，因此人类没有良好的研究工具，并且人类CLEC-2的功能尚未完全理解。 [目的]这项研究旨在通过对人IPS细胞衍生的巨核细胞系进行基因组编辑来产生CLEC-2缺陷的人血小板，该细胞系在成熟后可以产生血小板，并分析人类CLEC-2对止血和血栓形成的影响。 [方法和结果]引入了源自人IPS细胞的巨核细胞系，该细胞系在成熟后会产生血小板。已经重复了从细胞培养到血小板的过程，并建立了一个系统以允许稳定的血小板产生。通过流式细胞仪分析了CLEC-2在产生的血小板中的表达，并证实CLEC-2的表达方式与人类血液收集获得的血小板相同，并被配体若丹环胺激活。

项目成果

硫酸化多糖カラギーナンはCLEC-2依存性に血小板を活性化する

硫酸化多糖角叉菜胶以 CLEC-2 依赖性方式激活血小板

• 发表时间: 2022
• 作者: 横森良平;白井俊光;佐々木知幸;築地長治;大石沙織;高野勝弘;井上克枝
• 通讯作者: 井上克枝