iPS細胞由来巨核球が産生する血小板を活用したヒトCLEC-2の機能解析

【背景】血小板活性化受容体CLEC-2は、マウスにおいては血栓の安定化、腫瘍の転移促進などに関わるが、生理的な止血への関与は少ない。そのため、CLEC-2の阻害が出血リスクの少ない抗血栓療法として期待されている。しかし、直接遺伝子改変ができないという血小板の特殊性から、ヒトでは良い研究ツールがなく、ヒトCLEC-2の機能は十分に解明されていない。【目的】本研究では、成熟後に血小板を生成できるヒトiPS細胞由来巨核球細胞株にゲノム編集を施すことで、CLEC-2欠損ヒト血小板を生成し、ヒトCLEC-2の止血・血栓形成への影響を解析することを目的とする。【方法・結果】成熟後に血小板を生成できるヒトiPS細胞由来巨核球細胞株を導入した。細胞培養から血小板生成までの過程を繰り返し行い、安定的に血小板を産生できる体制を整えた。産生した血小板におけるCLEC-2の発現をフローサイトメトリー法で解析し、ヒトから採血して得られた血小板と同様にCLEC-2が発現していること、リガンドであるロドサイチンで活性化することを確認した。

【背景】血小板活性化受容体CLEC-2は、マウスにおいては血栓の安定化、腫瘍の転移促進などに関わるが、生理的な止血への関与は少ない。そのため、CLEC-2の阻害が出血リスクの少ない抗血栓療法として期待されている。しかし、直接遺伝子改変ができないという血小板の特殊性から、ヒトでは良い研究ツールがなく、ヒトCLEC-2の機能は十分に解明されていない。【目的】本研究では、成熟後に血小板を生成できるヒトiPS細胞由来巨核球細胞株にゲノム編集を施すことで、CLEC-2欠損ヒト血小板を生成し、ヒトCLEC-2の止血・血栓形成への影響を解析することを目的とする。【方法・結果】成熟後に血小板を生成できるヒトiPS細胞由来巨核球細胞株を導入した。細胞培養から血小板生成までの過程を繰り返し行い、安定的に血小板を産生できる体制を整えた。産生した血小板におけるCLEC-2の発現をフローサイトメトリー法で解析し、ヒトから採血して得られた血小板と同様にCLEC-2が発現していること、リガンドであるロドサイチンで活性化することを確認した。