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異種動物体内での機能的な副甲状腺再生

异生体中的功能性甲状旁腺再生

基本信息

批准号：
21K16337
负责人：
加納麻弓子
金额：
$ 3万
依托单位：
St. Marianna University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

令和4年度は胚盤胞補完法によって作出したマウスES細胞由来の副甲状腺が移植臓器として有効に機能し得るかを検証した。Pth-tdTomato蛍光レポーターマウスを用いて、蛍光実体顕微鏡下で副甲状腺を摘出し副甲状腺機能低下症モデルマウスを作製した。副甲状腺機能低下症モデルマウスの腎臓被膜下へ胚盤胞補完法によって作成したマウスES細胞由来の副甲状腺を移植し、2～4週間毎に採血を行った。腎被膜下移植群はSham群と比較して有意に血中Ca値が上昇した。さらに、メイロン負荷試験に対するPTHの反応性も腎被膜下移植群はSham群と比較して有意に上昇した。以上の結果から、胚盤胞補完法によって作出したマウスES細胞由来の副甲状腺が移植臓器として機能し、副甲状腺機能低下症モデルマウスの病態を改善したことが示唆された。次に先天性副甲状腺機能低下症への治療効果を確認するために、Gcm2KOマウス新生児にマウスES細胞由来の副甲状腺を皮下移植した。Gcm2KOマウス新生児は未治療の場合高い確率で死亡するが(致死率95％) 、マウスES細胞由来の副甲状腺を移植されたことで生存期間の延長が認められた。次年度に向けて、副甲状腺欠損ラット胚の作出を行った。ラット前核期胚にエレクトロポレーションによってGcm2を標的としたsgRNAとCas9を導入した後に仮腹へ移植し、Gcm2KOラット新生児を得た。得られたGcm2KOラットではPTHの低下と副甲状腺の組織学的欠損、頸部～縦郭のPth発現の著明な低下が認められ、副甲状腺が完全に欠損していると考えられた。

In 2004, the embryo cell repair method was used to verify the origin of the parathyroid gland and the function of the embryo cell. Pth-tdTomato is a microscopical study of hypoparathyroidism. Hypoparathyroidism is caused by hypoparathyroidism, which is caused by hypoparathyroidism, and by hypoparathyroidism, which is caused by hypoparathyroidism, which is caused by hypoparathyroidism. In the subcapsular graft group, the serum Ca value increased significantly compared with the Sham group. The number of renal subcapsular grafts increased significantly in comparison with the number of renal subcapsular grafts. The above results show that hypothyroidism is a disease caused by hypothyroidism and hypothyroidism. The results of treatment of congenital hypoparathyroidism were confirmed by subcutaneous transplantation of Gcm2KO cells. Gcm2KO is a high mortality (95% mortality) and a prolonged survival period of ES cells. The next year, the thyroid gland was damaged. Gcm2 gene expression was detected by PCR, and Gcm2 gene expression was detected by PCR. Gcm2KO was found to be low in PTH and histologically deficient in parathyroid gland, and Pth was found to be low in the neck and completely deficient in parathyroid gland