Development of therapeutic strategies for glioblastoma by simultaneously targeting tumor stem cells and differentiated tumor cells

前年度までの決定した併用治療薬剤A(GSC target)と薬剤B(DGC target)をヒトグリオーマ由来細胞株に投与し、無治療、薬剤A、薬剤Bの単独投与、併用(薬剤A,薬剤B同時投与)の4群の細胞株を作成し、RNA-sequencingに提出、発現が変化した遺伝子と、それに伴い変動しているPathwayを解析した。その結果からPI3k-Akt-mTOR pathwayとCell cycleに関するpathwayが薬剤処理により抑制されることが確認され、これらの結果を細胞から抽出したproteinでWestern Blottingでも示した。In vitroにおいては上記に加え、単剤および薬剤併用による細胞周期の変化と、Apoptosisの増加を確認した。In vivo実験では、ヌードマウスにVitroで使用したものと同じ細胞株を移植後、無治療、薬剤A、薬剤Bの単独、および併用の4群に分けて治療を行った。治療後、脳組織を採取しH.E染色と免疫染色を実施し、治療が腫瘍組織に及ぼす影響を評価した。その結果、薬剤投与による腫瘍サイズの縮小、Cell Cycle停止に伴う増殖能の低下(KI-67陽性率の低下)、Apoptosis細胞の増加(Cleaved- Caspase3陽性細胞の増加)を認めた。またこれらの組織で認めた変化は単剤治療と比較して併用療法でより強化されていることを確認した。

前年度までの決定した併用治療薬剤A(GSC target)と薬剤B(DGC target)をヒトグリオーマ由来細胞株に投与し、無治療、薬剤A、薬剤Bの単独投与、併用(薬剤A,薬剤B同時投与)の4群の細胞株を作成し、RNA-sequencingに提出、発現が変化した遺伝子と、それに伴い変動しているPathwayを解析した。その結果からPI3k-Akt-mTOR pathwayとCell cycleに関するpathwayが薬剤処理により抑制されることが確認され、これらの結果を細胞から抽出したproteinでWestern Blottingでも示した。In vitroにおいては上記に加え、単剤および薬剤併用による細胞周期の変化と、Apoptosisの増加を確認した。In vivo実験では、ヌードマウスにVitroで使用したものと同じ細胞株を移植後、無治療、薬剤A、薬剤Bの単独、および併用の4群に分けて治療を行った。治療後、脳組織を採取しH.E染色と免疫染色を実施し、治療が腫瘍組織に及ぼす影響を評価した。その結果、薬剤投与による腫瘍サイズの縮小、Cell Cycle停止に伴う増殖能の低下(KI-67陽性率の低下)、Apoptosis細胞の増加(Cleaved- Caspase3陽性細胞の増加)を認めた。またこれらの組織で認めた変化は単剤治療と比較して併用療法でより強化されていることを確認した。