in situモデルを用いたデンタルバイオフィルムと歯肉上皮の共生機構の解明

使用原位模型阐明牙齿生物膜和牙龈上皮之间的共生机制

• 批准号: 21K16990
• 负责人: 外園 真規
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16990/
• 关键词: デンタルバイオフィルム; 歯肉上皮; 細菌叢

口腔内には様々な細菌が生息しており、これらの細菌が歯面に形成するデンタルバイオフィルムはう蝕や歯周病の主な要因であると考えられている。しかし、う蝕や歯周病はその他の感染症と異なり、生命を脅かす重篤な症状とならず、口腔はデンタルバイオフィルムに対して免疫応答しながら上皮バリアを機能させていると考えられる。デンタルバイオフィルムと歯肉上皮細胞の共培養のためのモデルの確立およびその特徴についての解析を行うこととした。令和3年度に行っていた実験モデルでは、上皮細胞は単層であり、ヒト歯肉を模倣しているとはいえない。このため，令和4年度に歯肉線維芽細胞株および歯肉上皮細胞株といった複数の細胞株を用いた歯肉モデルを確立した。歯肉モデルの切片の観察を行ったところ、線維芽細胞の層の上に上皮細胞の層が認められ、歯肉を模倣した構造の再現が出来ていることが確認されたため、被験者から採取した実験的デンタルバイオフィルムと確立した歯肉モデルを共培養することとした。被験者から採取する実験的バイオフィルムサンプルの数が限られるため、共焦点レーザー顕微鏡観察の際に死菌、生菌、菌体外多糖をそれぞれ異なる色で染色する方法を確立を行った。令和3年度はコロナウイルス感染症まん延のため、被験者の口腔で作成したin situデンタルバイオフィルムを採取することが難しかったが，被験者を集め，採取したin situデンタルバイオフィルムと新たに確立した歯肉モデルを共培養し，バイオフィルムに関してはDNA抽出，共焦点レーザー顕微鏡観察を行い，歯肉モデル細胞に関してはRNA抽出，組織切片の観察を行った。

In the oral cavity, bacteria live and grow, and bacteria form in the mouth.ンタルバイオフィルムはう炄歯week Diseaseの主なcautionであると考えられている.しかし, うerosion や歭week disease はそのhis のinfectious disease とdifferent なり, life を threat かす重 Du な symptoms と な ら ず, oral はデンタルバイオフィルムに対してimmuneￜanswersしながらepithelial バリアをfunctionさせていると考えられる. Co-culture of human epithelial cellsデルのEstablishedおよびその特徴についてのanalyticsを行うこととした. In the 3rd year of Reiwa, there are に行っていた実験モデルでは, epithelial cell は単layer であり, and ヒト歯肉をimitating しているとはいえない. In the 4th year of Reiwa, the fibroblast fibroblast cell strain, the fibroblast epithelial cell strain, and the plurality of fibroblast epithelial cell lines were established with the いた歯肉モデルを.筯肉モデルの片の観看を行ったところ, Line-dimensional bud cell layer の上に epithelial cell の Layer がcognition められ, 歯肉をimitating したstructural のappearanceが出ていることがconfirmationされたため、した実験’s デンタル who was taken by 験からバイオフィルムとEstablished した歯肉モデルをco-culture することとした. The subject of the attack is the バイオフィルムサンプルのnumberがlimitられるため, the confocal focus of the する実験Microscopic observation of dead bacteria, live bacteria, and extracellular polysaccharides has been carried out using different color staining methods and has been established. Reiwa 3rd year はコロナウイルス infectious disease まん extension のため, the victim's mouth で したin situデンタルバイオフィルムをadopt することが difficult しかったが, the one who was taken in をassemble め, take したin situデンタルバイオフィルムと新たにEstablishmentした肉モデルをco-cultureし,バイオフィルムに关してはDNA Extraction, confocal microscopic observation and inspection, extraction of RNA from human cells, and inspection of tissue sections.