システインパースルフィド含有タンパク質の化学合成と生理的意義の探求

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本研究は、システインパースルフィド (Cys-SSH) を有するペプチド (タンパク質) の物性を仔細に調査し、タンパク質のフォールディングに対する影響を検証することで、Cys-SSHの新たな生理的意義を探求することを目的として行う。この目的を達成するため、化学合成の手法を駆使することで均一なCys-SSH含有ペプチド (タンパク質) を調製する方法を確立し、その物性を評価する。また、フォールディングの速度に及ぼす影響を検証し、Cys-SSHの潜在的な機能を明らかにする足掛かりを得ることを目指しているそこで本年度では、まず均一なCys-SSH含有ペプチドを調製する手法の開発を試みた。その結果、ペプチド合成で汎用される保護基の一つであるトリチル基を構造内に持つ、トリフェニルメタンチオールをCysとSS結合により架橋した後、酸性条件下で脱保護するだけの簡便な手法でCys-SSHを有するペプチドを調製することに成功した。続いて、得られたCys-SSH含有ペプチドの安定性を検証したところ、酸性条件下ですら徐々に分解していくことが観測された。そこでCys-SSHの安定性を増加させる添加物の検討を進めたところ、アセトニトリルや糖類の添加により安定性が増加することを見出した。その一方で、Cys-SSH含有ペプチドを安定的に単離することは困難であったため、続くフォールディング反応を見据え、グルタチオンをトリスルフィド結合により架橋した「Cys含有ペプチドの等価体」を調製した。今後は、引き続きCys-SSH含有ペプチドの安定性を検証するとともに、グルタチオンをトリスルフィド結合で架橋した等価体を用いたフォールディング反応の検討を進める予定である。