微生物代謝物であるネオエキヌリンAの抗アレルギー効果と作用機構の解明

阐明微生物代谢物新毛尖素 A 的抗过敏作用和作用机制

• 批准号: 22K14851
• 负责人: 石田 萌子
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K14851/
• 关键词: (-)-ネオエキヌリンA; 抗アレルギー効果; 脱顆粒; RBL-2H3細胞; ネオエキヌリンA; 抗アレルギー; 構造活性相関

(-)-ネオエキヌリンAは、海洋性真菌の二次代謝産物であるインドールアルカロイドである。本研究では、(-)-ネオエキヌリンAの生体内外における抗アレルギー効果とその作用機構の解明を目的としている。本年度は、ラット好塩基球細胞株RBL-2H3細胞を用いて、脱顆粒抑制による抗アレルギー効果の検討とその作用機構の解明に取り組み、下記に示す成果を得た。RBL-2H3細胞を、ジニトロフェニル（DNP）特異的IgEで感作した後、培地に(-)-ネオエキヌリンAを添加し、その後DNP-HSAによる抗原刺激で脱顆粒を誘導した。顆粒中に含まれるβ-ヘキソサミニダーゼの放出率を指標として抗原誘導性脱顆粒に対する効果を評価した。その結果、(-)-ネオエキヌリンAは細胞毒性を示すことなく脱顆粒を有意に抑制した。(-)-ネオエキヌリンAが脱顆粒を抑制する作用機構を明らかにするため、細胞内カルシウムイオン濃度に及ぼす影響を検討したところ、抗原誘導性の細胞内カルシウムイオン濃度の上昇が(-)-ネオエキヌリンAにより抑制された。また、シグナル伝達因子に与える影響をウェスタンブロッティング法により検討した結果、脱顆粒シグナルの上流に位置するLynの活性化には影響せず、その下流にあるSykのリン酸化を抑制することが確認された。また、Aktのリン酸化レベルの低下も確認された。これらのことから、(-)-ネオエキヌリンAはSykおよびAkt経路を下方制御することで細胞外からのカルシウムイオン流入を阻害し、脱顆粒を抑制することが示唆された。

（ - ） - 新均等蛋白A是吲哚生物碱，是海洋真菌的继发代谢产物。这项研究旨在阐明（ - ） - 新冲动蛋白A及其动作机理的抗抗乳糖作用。今年，我们对抑制脱粒的抗过敏作用进行了研究，并使用大鼠嗜碱性细胞系RBL-2H3细胞阐明了作用机理，并实现了下面所示的结果。在用二硝基苯基（DNP）特异性IgE敏化RBL-2H3细胞后，（ - ） - 新冲动蛋白A将其添加到培养基中，然后用DNP-HSA抗原刺激诱导脱粒。使用颗粒中包含的β-己糖胺酶的释放速率作为指数评估了对抗原诱导的脱粒的影响。结果，（ - ） - 新冲动蛋白A显着抑制了脱粒，而没有表现出细胞毒性。为了阐明（ - ） - 新冲动蛋白A抑制脱粒的作用机制，我们研究了细胞内钙离子浓度对细胞内钙离子浓度的影响，以及（ - ） - 新毒素A抑制抗原抑制的抗原诱导的抗原抑制了离子内钙的增加。此外，通过蛋白质印迹研究了对信号转导因子的影响，并确认它不影响Lyn的激活，Lyn位于脱粒信号的上游，并抑制了SYK下游的磷酸化。此外，还证实了AKT磷酸化水平的降低。这些结果表明（ - ） - 新冲动蛋白A抑制细胞外部钙离子的涌入，并通过下调SYK和AKT途径来抑制脱粒。