AAVキャプシド中和抗体陽性者に対するAAVベクターを用いた遺伝子治療法の開発

使用 AAV 载体开发 AAV 衣壳中和抗体阳性个体的基因治疗

• 批准号: 22K15323
• 负责人: 綿野 亮太
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15323/
• 关键词: 遺伝子治療; AAVベクター; 中和抗体

本研究では、これまで遺伝子治療の対象外とされてきた)AAVキャプシド中和抗体陽性者に対し、開発中の中和抗体回避法の実用化を待つことなく、現行の方法で効果発現可能な遺伝子治療法の開発を目的とする。2022年度は、以下の検討を行った。1)中和抗体価を従来の方法より感度よく定量できる新規中和抗体測定法の開発を行った。培養細胞を用いた中和抗体測定法において、AAVベクターを細胞に感染させる際、培養液中にグルコースを一定濃度添加することで、AAVベクターの遺伝子発現が有意に上昇することを確認した。また、発光量の高いレポーター遺伝子を搭載したAAVベクターを細胞に感染させ、当研究で見い出した感染誘導試薬のグルコースを添加することで、従来の中和抗体測定法よりも有意に高い中和抗体測定感度を示す新規中和抗体測定法を確立した。2)AAVキャプシド中和抗体陽性マウスの作製と、肝臓で遺伝子発現可能な中和抗体価の上限の明確化に向けた検討を行った。C57BL6/Jマウスに市販のヒト免疫グロブリン製剤を投与し、目的の中和抗体価を持つ)AAVキャプシド中和抗体陽性マウスを作製した。目的の中和抗体価を持つマウスにレポーター遺伝子を搭載したAAVベクターを低用量、中等量、または高用量血管内投与し、投与量ごとに、肝臓での遺伝子発現と中和抗体価の関係を確認した。

This study で は, こ れ ま で heritage 伝 son treatment の like outside seaborne と さ れ て き た) AAV キ ャ プ シ ド neutralizing antibody positive に し seaborne, open 発 の neutralizing antibody の avoidance method be with the を stay つ こ と な く, method of current の で unseen fruit 発 may now な heritage 伝 child therapy の open 発 を purpose と す る. For the year 2022, を and the following 検 検 request を and った. 1) Neutralizing antibodies 価を従 to <s:1> method よ sensitivity よく quantification で る る る new regulation neutralizing antibody determination method <e:1> development を line った. Culture cell を with い た neutralizing antibody assay に お い て, AAV ベ ク タ ー を cells に infection さ せ る interstate, medium, に グ ル コ ー ス を certain concentration added す る こ と で, AAV ベ ク タ ー の heritage 伝 son 発 now rising が intentionally に す る こ と を confirm し た. High い ま た, 発 light の レ ポ ー タ ー posthumous son 伝 を carry し た AAV ベ ク タ ー に を cells infected with さ せ, see when the で い し た infection induced try 薬 の グ ル コ ー ス を add す る こ と で, 従 の neutralizing antibody assay よ り も intentionally に high い neutralizing antibody determination sensitivity を す in new rules neutralizing antibody assay を establish し た. 2) AAV キ ャ プ シ ド neutralizing antibody positive マ ウ ス の is crucial for と, liver で posthumous son 伝 発 may now な neutralizing antibody 価 の ceiling の explicit に to け た 検 line for を っ た. C57BL6 / J マ ウ ス に city vendor の ヒ ト immune グ ロ ブ リ ン tonic を cast and し, purpose の neutralizing antibody 価 を つ) AAV キ ャ プ シ ド neutralizing antibody positive マ ウ ス を cropping し た. Purpose の neutralizing antibody 価 を hold つ マ ウ ス に レ ポ ー タ ー posthumous son 伝 を carry し た AAV ベ ク タ ー を, low consumption, moderate amount ま た は high dosage of intravascular and し, shots and quantity ご と に routine, liver で の posthumous son 伝 発 now と neutralizing antibody 価 の を masato department confirmed し た.

项目成果

Development of an improved assay for neutralizing antibodies against AAV capsids

开发一种改进的 AAV 衣壳中和抗体检测方法

• 发表时间: 2022
• 作者: Iguchi T.;Kuroda M.;Morita H.;Mimaki Y.;高橋直熙，井口巴樹，永峯杏樹，横須賀章人，三巻祥浩;Ryota Watano
• 通讯作者: Ryota Watano