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Elucidation of survival strategy of virus by targeting for 14-3-3epsilon

以14-3-3ε为靶点阐明病毒的生存策略

基本信息

批准号：
22K15476
负责人：
坂直樹
金额：
$ 3万
依托单位：
Wakayama Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

ヒトパラインフルエンザウイルス2型(hPIV2)のV蛋白は、これまでに多くの宿主蛋白との結合が報告されており、中でも免疫システムに関与している宿主蛋白と結合することで免疫応答を抑制していることがわかっている。本研究は14-3-3εに着目し、hPIV2のV蛋白と14-3-3εとの結合が宿主の免疫システムやアポトーシスに関与していると考え、研究を進めた。hPIV2のV蛋白と14-3-3εの部分欠損変異体との共免疫沈降(IP)によって、14-3-3εのV蛋白との結合部位はN末端部分であると同定した。さらに、14-3-3εはV蛋白の機能欠損変異体(Vmut)とは結合しないことが分かった。また、14-3-3εのノックダウン細胞株を作製し、それによる解析により、14-3-3εの欠損はhPIV2の増殖を負に制御することが分かった。リバースジェネティクス法により作製したhPIV2の野生型ウイルス(rPIV2/wt)とVmutを持つウイルス(rPIV2/Vmut)を感染させてcaspaseの活性を測定すると、rPIV2/wtはrPIV2/Vmutよりcaspaseの活性化を抑制し、アポトーシスを抑制していることが分かった。14-3-3εは切断されると、アポトーシスが促進されることが知られている。rPIV2/wtの感染により14-3-3εは切断されたが、rPIV2/Vmutを感染させた方が14-3-3εの切断量は増加していた。この結果より、V蛋白あるいはVmutを発現させた細胞にアポトーシス誘導剤を作用させたところ、V蛋白を発現させた細胞は14-3-3εの切断量が減少していたことから、V蛋白は14-3-3εと結合することによって14-3-3εの切断を抑制しており、結果としてアポトーシスを抑制していると考えられる。

The V protein of hPIV2 binds to multiple host proteins and inhibits immune response. This study is aimed to investigate the relationship between 14-3 - 3 ε and hPIV2 V protein binding and host immunity. The binding site of hPIV2 V protein to 14-3 - 3ε is identical to that of the N-terminal part. 14-3-3ε V protein and functional impairment of foreign (Vmut) The 14-3-3ε cell line was isolated and analyzed. The 14-3-3ε cell line was isolated and analyzed. The 14-3-3ε cell line was isolated and analyzed. The wild type of hPIV2 (rPIV2/wt) and Vmut (rPIV2/Vmut) were inhibited by the gene expression method, and the caspase activity was measured by the gene expression method. 14-3-3εrPIV2/wt infection rate was 14-3-3ε, and rPIV2/Vmut infection rate was 14-3-3ε. As a result, Vmut protein was found to inhibit the 14 - 3 - 3ε cleavage in cells.