アミノ酸輸送体LAT1依存的リン酸化シグナルにおけるチロシンリン酸化制御機構解明

阐明氨基酸转运蛋白 LAT1 依赖性磷酸化信号中酪氨酸磷酸化的调节机制

• 批准号: 22K15512
• 负责人: 岡西 広樹
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15512/
• 关键词: アミノ酸; トランスポーター; プロテオミクス; リン酸化プロテオミクス

がん細胞では，細胞増殖等の調節に関わるタンパク質の翻訳後修飾リン酸化ネットワークの制御に異常が生じている．アミノ酸はこのリン酸化ネットワークを刺激するシグナル分子としての機能を持つ．がん細胞特異的アミノ酸トランスポーターLAT1は，がん特異的な細胞内環境形成に寄与するアミノ酸シグナル機構を構成しているものと考えられる．申請者はこれまで，固定化金属イオンアフィニティークロマトグラフィー (IMAC) によるリン酸化濃縮法を用いたプロテオーム解析により，LAT1を起点としたリン酸化ネットワークを解明してきた．この方法は主にセリン・スレオニンのリン酸化動態の広範な解明には非常に有用である一方で，悪性腫瘍の発生に深く関与する受容体型・非受容体型チロシンキナーゼが触媒するチロシンのリン酸化は微量なため同定が難しく，より特異的な方法が必要であった．本年度では，まず (1) 非常に特異性の高い競合的LAT1阻害薬ナンブランラト (JPH203) により有意な抗腫瘍効果を評価済みの胆道がん細胞株3種類(KKU-055, KKU-100, KKU-213) において，タンパク質チロシンリン酸化ネットワーク変動に加えて、グローバルリン酸化ネットワーク変動および発現タンパク質変動を詳細に調べた．具体的には，LAT1阻害薬の添加の有無のそれぞれの条件で24 時間処理した細胞サンプルから，相間移動溶解剤による抽出法でタンパク質を抽出し，サンプル調製を行い，定量チロシンリン酸化・定量リン酸化プロテオーム解析による修飾動態差異解析，定量プロテオーム解析による発現差異解析に供した．これらの結果を統計学的抽出およびデータベース化し，統計学的に有意な発現変動分子群,およびリン酸化修飾変動分子群を分子ネットワーク解析ソフトIPAによって解析した．

The regulation of cell proliferation and so on is related to the production of abnormal cells. The function of the molecule is maintained by the stimulation of the acid. A cell-specific environment is formed in the cell and a cell-specific mechanism is formed. The applicant is interested in immobilizing the metal in the solution of the problem. This method is very useful for understanding the dynamics of acidification. It is necessary to develop a specific method for the development of sex tumors. This year, there are three types of bile duct cell lines: (1) highly specific and highly competitive LAT 1 inhibitor (JPH 203), and (2) intentionally anti-tumor effect evaluation.(KKU-055, KKU-100, KKU-213) Detailed adjustment of quality change. Specifically, LAT 1 inhibitor addition and absence of different conditions, 24-time treatment, phase shift dissolution, extraction, quality extraction, modulation, quantitative acidification, quantitative acidification, quantitative analysis, dynamic analysis, quantitative analysis, differential analysis. The results are statistically extracted and analyzed. Statistically, the molecular population is intentionally generated.