RNA認識受容体の2型自然リンパ球制御機構から見た気管支喘息新規治療探索

从RNA识别受体2型先天淋巴细胞调节机制探索支气管哮喘新疗法

• 批准号: 22K16165
• 负责人: 石井 崇史
• 金额: $ 3万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16165/
• 关键词: 気管支喘息; 自然免疫系; ２型自然リンパ球; 自然免疫

野生型マウスとMDA5KOマウスから２型自然リンパ球(ILC2)を分離するためにマウスにIL-33を点鼻投与し、一定期間後に気管支肺胞洗浄液と肺を回収した。気管支肺胞洗浄液中の好酸球は両群で顕著な差は認めなかった。回収肺に酵素処理を行うことで単細胞懸濁液を得て蛍光抗体を用いてILC2を分離した。肺ILC2総数に関しては両群で軽度の相違が示唆された。分離したILC2を細胞培養プレートに播種し、IL-33やRNA系自然免疫受容体活性化物質(5’ppp-RNA, HMW polyI:C)を用いて刺激し、一定時間経過後に細胞上清とRNAを回収し、IL-13タンパク濃度や遺伝子発現をELISA, qPCR法で測定した。結果、野生型マウスILC2においてIL-33刺激により期待通りにIL-13が高濃度に分泌される事を確認した。一方、MDA5KOILC2ではIL-13濃度に軽度の差異が認められた。5’ppp-RNA, HMW polyI:C刺激ではIL-13は微量産生にとどまった。qPCRではIL-13では上記所見に矛盾しない結果が得られた。ILC2は高度に放出するとして有名なIL-5/IL-13以外にも様々なサイトカイン含めた液性因子を産生するが、現在その他の遺伝子に関して検討している。また、アレルゲンを用いた気管支喘息モデルの作成と表現型解析は、一部完了している。今後はRNA系自然免疫受容体活性化物質刺激によるILC2活性変化の生体内における役割や、RNA系自然免疫受容体自体がアレルギー性気道炎症のどのように関与するかを解明していく。

Wild type MDA5KO is isolated from ILC2 by nasal administration of IL-33, and after a certain period of time, it is isolated from lung lavage fluid. The acid ball in the pulmonary lavage fluid is not easy to recognize. The enzyme is used to isolate the cells. ILC2 counts are related to the degree of conflict between groups. Isolation of ILC2 cells was carried out by seeding, IL-33 and RNA system natural immune receptor activating substance (5 'ppp-RNA, polyHMW I:C) were stimulated with medium, RNA was recovered from cell supernatant after a certain period of time, IL-13 concentration and gene expression were measured by ELISA and qPCR. Results: wild-type ILC2 was stimulated by IL-33 and IL-13 was secreted at high concentrations. The difference in IL-13 concentration between MDA5 and KOILC2 was identified. 5 ′ ppp-RNA, HMW polyI:C stimulation is responsible for IL-13 production in trace amounts. qPCR is the result of a conflict between IL-13 and what has been observed. ILC2 is highly reactive and is currently involved in the production of other genes other than IL-5/IL-13. The expression pattern analysis was completed in part. In the future, the relationship between ILC2 activity in vivo stimulated by RNA natural immune receptor activation substances and inflammation in vivo induced by RNA natural immune receptor will be clarified.

项目成果

RNA-recognizing immune sensor regulates bleomycin-induced activation of macrophages, lymphocytes, and neutrophils and subsequent lung fibrosis

RNA识别免疫传感器调节博来霉素诱导的巨噬细胞、淋巴细胞和中性粒细胞的激活以及随后的肺纤维化

• 发表时间: 2022
• 作者: 園田桂子;永瀬聡;相庭武司;加藤浩一;志賀剛;草野研吾; 堀江稔;大野聖子;Takashi Ishii Yusuke MurakamiTomoya Narita Takahide Nagase Naomi Yamashita
• 通讯作者: Takashi Ishii Yusuke MurakamiTomoya Narita Takahide Nagase Naomi Yamashita