Elucidation of new pathophysiology of autoimmune pituitary diseases caused by a paraneoplastic syndrome

阐明副肿瘤综合征引起的自身免疫性垂体疾病的新病理生理学

基本信息

批准号：
22K16396
负责人：
蟹江慶太郎
金额：
$ 1.75万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

自己免疫性下垂体炎には腫瘍随伴症候群として発症する一群があることを見出し、その発症に特異的キラーT細胞が関与することを明らかにしてきた。しかし、患者固有のHLAを持つヒト下垂体を疾患モデルとして再現できないことから、病態についての十分な解析はなされておらず、さらに液性免疫としての補体依存性あるいは抗体依存性の細胞傷害活性の病態への関与も明らかではない。自己免疫性下垂体炎の患者由来iPS細胞を用いたin vitro疾患モデルを構築し、細胞性免疫および液性免疫の病態への関与を明らかにすることを通じて、腫瘍随伴症候群としての自己免疫性下垂体炎の病態解明とともに新規治療のシーズ探索を目指す。本研究は、①患者iPS細胞から下垂体の作成、②患者由来PIT-1特異的キラーT細胞の単離および患者由来下垂体との共培養を用いたin vitroモデル作成、③下垂体と患者血清、末梢血単核球細胞(PBMC)を用いたCDC活性、ADCC活性の評価、④in vitroモデルにおける細胞傷害の抑制因子の探索、⑤胸腺腫データベースを用いた解析の5ステップで実施する。①iPS細胞からの下垂体分化誘導手法を用いて、患者および健常人のiPS細胞由来下垂体（iPSC下垂体）を作成した。また、抗原タンパクであるPIT-1の制御下にGFPレポーターを発現するiPS細胞を用いて標的細胞の収集効率を高めた。②患者PBMCに対し、全長PIT-1タンパクをカバーする10アミノ酸ごとのペプチドを作成し、個別に添加して活性化するキラーT細胞を分取した。予備実験により特異的ペプチドを同定し、特異的T細胞の活性化（CD137発現）、細胞傷害性（CD107a発現）を確認していた。現在、これら下垂体細胞とキラーT細胞を共培養したin vitroモデルの条件最適化を行っている。

我们已经发现，有一组自身免疫性垂体炎作为副肿瘤综合征发育，并揭示了特定的杀伤性T细胞参与该疾病的发作。但是，由于无法将具有患者特异性HLA的人垂体作为疾病模型再现，因此尚未对病理进行充分的分析，而且尚不清楚依赖补体依赖性或抗体依赖性的细胞毒性活性作为病理学中的体液免疫。通过使用源自自身免疫性垂体炎患者的IPS细胞构建体外疾病模型，并阐明其参与细胞介导的和体液免疫的病理学，我们旨在阐明作为副型脑塑料综合征的自身免疫性垂体炎的病理学，并探索新治疗的种子。这项研究将分为五个步骤：1）从患者IPS细胞中创建垂体的垂体，2）使用患者衍生的PIT-1特异性杀手T细胞创建体外模型，并与患者衍生的垂体垂体共同培养，3）3）使用垂体，垂体，periperal sernucter pre cell（permeral perm）的cdc和ADCC活性（4）体外模型中细胞毒性的抑制剂，以及5）使用胸腺瘤数据库进行分析。 1）使用一种与IPS细胞诱导垂体分化的方法，创建了IPSC细胞衍生的垂体（IPSC垂体）患者和健康的人。此外，在抗原蛋白PIT-1的控制下，使用表达GFP记者的IPS细胞提高了靶细胞的收集效率。 2）在患者PBMC上，准备每10个氨基酸的肽覆盖全长PIT-1蛋白，并单独添加到分开的杀手T细胞以被激活。初步实验确定了特定的肽，证实了激活（CD137表达）和细胞毒性（CD107A表达）。当前，针对这些垂体细胞和杀伤T细胞共培养的体外模型进行了优化的条件。

项目成果

期刊论文数量（10）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Responsiveness to DDAVP in Cushing’s disease is associated with USP8 mutations through enhancing AVPR1B promoter activity

DOI：
10.1007/s11102-022-01220-4
发表时间：
2022-04
期刊：
Pituitary
影响因子：
3.8
作者：
Hiroki Shichi;H. Fukuoka;Maki Kanzawa;Masaaki Yamamoto;Naoki Yamamoto;Masaki Suzuki;Shin Urai;R. Matsumoto;Keitaro Kanie;Y. Fujita;H. Bando;G. Iguchi;N. Inoshita;S. Yamada;Yutaka Takahashi;Wataru Ogawa
通讯作者：
Hiroki Shichi;H. Fukuoka;Maki Kanzawa;Masaaki Yamamoto;Naoki Yamamoto;Masaki Suzuki;Shin Urai;R. Matsumoto;Keitaro Kanie;Y. Fujita;H. Bando;G. Iguchi;N. Inoshita;S. Yamada;Yutaka Takahashi;Wataru Ogawa

疾患iPS細胞を用いた自己免疫性下垂体疾患の in vitro疾患モデルの樹立

利用病变 iPS 细胞建立自身免疫性垂体疾病体外疾病模型