ラット肩腱板断裂モデルにおける骨格筋由来幹細胞移植による腱板再生効果

骨骼肌干细胞移植对大鼠肩袖撕裂模型的肩袖再生作用

• 批准号: 22K16751
• 负责人: 今井 洸
• 金额: $ 2.41万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16751/
• 关键词: 骨格筋間質由来幹細胞; 腱板断裂; bio-bond

腱板欠損モデル群と骨格筋間質由来幹細胞移植群の比較により、移植した幹細胞群が問題なく腱板として組織学的，生物学的な治癒を得られることを確認する研究を開始した．GFP-TGマウスの下腿三頭筋を採取し，移植可能な幹細胞群を安定して抽出しシートペレットを作成した．また、10週齢免疫不全ラットの肩腱板断裂モデルを作成し、それらの幹細胞群シートペレットをポリグリコール酸（スキャフォールドの役目として）に染み込ませ断裂部へ移植した．対照群としては腱板断裂のみを作成した免疫不全ラットを作成した．移植後1カ月で蛍光実体顕微鏡にてGFP陽性細胞を確認した．今のところ、明らかなGFP陽性細胞の確認までは至っていない．原因として，腱板断裂モデルを完全断裂で作成したことで，移植シートペレットが安定して断裂部にとどまることができていない可能性があること，また，幹細胞群のシートペレットをポリグリコール酸に染み込ませ移植しているが，それも断裂に安定してとどまることができていない可能性がある．移植細胞シートが安定して断裂部へとどまるような工夫を以前の報告などから模索し検討している．具体的な検討としては，完全断裂モデルでは肩甲上腕関節や滑液包などの腱板を取り囲む空間が大きいことや関節という可動性の大きな組織であることから移植細胞の不安定化に寄与していると考え，不全断裂モデルの作成や移植シートペレットを覆うような処置（滑膜縫合など）を考えている．移植細胞群の安定化が獲得できれば，同部位への腱・軟骨細胞マーカーを用いた幹細胞群の分化や機能的評価を行うことができると考えている．並行して，対照群のサンプリングや凍結切片の作成を行っており，腱骨移行部評価を今後スムーズに行えるように準備をしている．

我们已经开始一项研究，以确认植入的干细胞组可以作为肩袖缺损模型组，并且骨骼肌基质衍生的干细胞移植组可以作为肩袖治愈，而不会出现任何问题。收集了GFP-TG小鼠的三头肌肌肉，并稳定地提取可植入的干细胞以产生薄片。此外，创建了10周龄的免疫缺陷大鼠的肩袖撕裂模型，并将干细胞组薄片颗粒浸泡在多乙醇酸中（作为脚手架的作用）并植入泪液区域。作为对照组，仅用肩袖撕裂而形成免疫缺陷的大鼠。植入后一个月通过荧光立体显微镜证实GFP阳性细胞。目前，尚未明确确认GFP阳性细胞。原因是肩袖撕裂模型是用完整的撕裂而创建的，植入的薄板颗粒可能不会在撕裂时保持稳定。此外，将干细胞基团的薄片浸泡在多乙醇酸中并植入，但这在撕裂时可能不会保持稳定。根据以前的报告，我们正在寻找并考虑使植入细胞板稳定并保持撕裂的方法。具体考虑的是，在完整的撕裂模型中，肩袖周围的大空间（例如肩cap骨关节和毛bursa）以及关节的较大迁移率有助于植入植入细胞的稳定，我们正在考虑创建失败的撕裂模型和程序以覆盖植入的板板（例如synovial suture）。如果可以实现植入细胞组的稳定化，则认为可以在同一部位使用肌腱和软骨细胞标记来区分并在功能上评估干细胞组。同时，我们对对照组进行了采样并创建了冷冻切片，并准备在将来平稳评估肌腱骨过渡区域。