ミトコンドリア病モデル内耳細胞を用いたミトコンドリア難聴の病態解明

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「難聴」はミトコンドリア病において最も頻度の高い症状であるが、その根本的な治療法は存在しない。マウス由来内耳感覚細胞株を用いて、ミトコンドリア病モデル内耳感覚細胞を作成し、内耳蝸牛におけるミトコンドリアの機能および動態評価を進めてきた。マウス内耳由来感覚細胞株（HEI-OC1）を用いて、NDUFA1遺伝子に対するsiRNAを用いてNDUFA1遺伝子をノックダウンした。siRNAをトランスフェクションし７２時間及び９６時間共にqRT-PCRではmRNAで遺伝子発現の抑制を確認しミトコンドリア病モデル内耳感覚細胞を作成した。NDUFA1がタンパクレベルでも発現低下しているか検討を行った。NDUFA1は非常に低分子量のタンパク質であり、ウエスタンブロット法での検出に条件検討を行った。ミトコンドリア機能解析として、まず検出キットを用いて染色しミトコンドリアの膜電位を測定した。正常のHEI-OC1細胞ではH2O2負荷で膜電位が濃度依存的に低下することを確認した。一方で作成した内耳感覚細胞ミトコンドリア病モデルではsiRNAをトランスフェクションし７２時間、９６時間後では膜電位の低下は認められず更なる検討が必要と考えられた。また、正常のHEI-OC1細胞のミトコンドリアを検出キットを用いて染色し、蛍光顕微鏡を用いてミトコンドリアの移動能の測定、および形態を観察できるように条件検討を行いミトコンドリア病モデルでも解析を進めている。