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ミトコンドリア病モデル内耳細胞を用いたミトコンドリア難聴の病態解明

使用线粒体疾病模型内耳细胞阐明线粒体听力损失的病理学

基本信息

批准号：
22K16912
负责人：
上原奈津美
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16912/
关键词：
ミトコンドリア難聴内耳 NDUFA1

项目摘要

「難聴」はミトコンドリア病において最も頻度の高い症状であるが、その根本的な治療法は存在しない。マウス由来内耳感覚細胞株を用いて、ミトコンドリア病モデル内耳感覚細胞を作成し、内耳蝸牛におけるミトコンドリアの機能および動態評価を進めてきた。マウス内耳由来感覚細胞株（HEI-OC1）を用いて、NDUFA1遺伝子に対するsiRNAを用いてNDUFA1遺伝子をノックダウンした。siRNAをトランスフェクションし７２時間及び９６時間共にqRT-PCRではmRNAで遺伝子発現の抑制を確認しミトコンドリア病モデル内耳感覚細胞を作成した。NDUFA1がタンパクレベルでも発現低下しているか検討を行った。NDUFA1は非常に低分子量のタンパク質であり、ウエスタンブロット法での検出に条件検討を行った。ミトコンドリア機能解析として、まず検出キットを用いて染色しミトコンドリアの膜電位を測定した。正常のHEI-OC1細胞ではH2O2負荷で膜電位が濃度依存的に低下することを確認した。一方で作成した内耳感覚細胞ミトコンドリア病モデルではsiRNAをトランスフェクションし７２時間、９６時間後では膜電位の低下は認められず更なる検討が必要と考えられた。また、正常のHEI-OC1細胞のミトコンドリアを検出キットを用いて染色し、蛍光顕微鏡を用いてミトコンドリアの移動能の測定、および形態を観察できるように条件検討を行いミトコンドリア病モデルでも解析を進めている。

The most frequent symptoms of "difficult disease" are the most frequent, and the most fundamental treatment methods exist. It is derived from the inner ear sensory cell line and is used to produce and evaluate the function of the inner ear sensory cell line. NDUFA1 gene expression vector is used to detect siRNA in HEI-OC1 cells. siRNA-induced gene expression was confirmed by qRT-PCR at 72 and 96 hours, respectively. NDUFA1 is the first time that a search has been made. NDUFA1 is a very low molecular weight polymer. The membrane potential of the membrane was determined by the analysis of the membrane potential of the membrane. Normal HEI-OC1 cells were found to have a concentration-dependent decrease in membrane potential due to H2O2 loading. One side made the inner ear sensory cells to respond to the response time 72 hours, 96 hours later, the membrane potential decreased, and the response time was necessary. For normal HEI-OC1 cells, the cell cycle was detected by staining, fluorescence microscopy, measurement of cell cycle mobility, morphological observation, and conditional analysis.