加齢黄斑変性患者への移植に向けたハイドロゲル包埋RPE細胞シートの作成

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温度応答性培養皿を用いて培養したRPE細胞をきれいに剥離するための微調整をしている。培養皿は37℃で培養した細胞を20℃以下にするだけでシート状に剥離が可能となるが、申請者の予備実験では、RPE細胞単独では、温度の下降だけでは剥がすことができないことを確認している。これは、RPE細胞が単層で培養されるため極めて脆弱でありピペッティング操作では簡単に壊れてしまうことやラミニンなどのコーティング無しでは培養皿に接着できないが、一方コーティングするとかなり接着が強まってしまうことが考えらる。そのため、培養しているRPE細胞上にゼラチンを入れ冷却するとゼラチンとともにRPE細胞が剥離できることが確認できた。現在は完全なシート状に剥離するため、コーティング試薬や細胞量を微調整している段階である。また、剥離したRPEシートを包埋する素材についても検討している。20℃以下で剥離したRPEシートをゼラチンゲルで包埋し、シートの形状を保持できるか確認する。その後生体温度に近い37℃とし、ゼラチンがゾル化しRPEシートのみとなることを確認する。ただし、ゼラチンは炎症を惹起することが報告されているため、現在はゼラチンの特徴を検討中であり、作製したRPEシートを包埋し形状を保てるかを確認する。