C型肝炎ウイルスにおける発症機序の解析

丙型肝炎病毒发病机制分析

• 批准号: 09770389
• 负责人: 加藤 純子
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770389/
• 关键词: C型肝炎ウイルス; 肝細胞癌; 非構造蛋白質; Cre; lox-P; トランスジュニックマウス; lox-pシステム

C型肝炎ウイルス(HCV)の感染による肝炎は、高率に慢性化し、肝硬変を経て、さらに肝細胞癌へと進展する深刻な感染症である。HCVがどのようなプロセスを経て、宿主を癌化へと導くのかは、全く解明されていない。DNA組み換え酵素であるCreにより、遺伝子の発現が開始されるCre/lox-Pスイッチング発現システムを用いて、HCV蛋白質、特に肝細胞癌に関与しているといわれるNS3蛋白質の働きをみるために、HCV遺伝子の非構造蛋白質部分を組みこんだTgマウスを作製し、解析を試みた。慢性肝炎患者の血清から抽出したHCVを、NS2領域からNS5a領域までをクローニングし、Cre/lox-Pスイッチング発現ユニットに組みこみ、Tgマウスを作成した。トランスジーンの組み込みがあるものは、PCR法により11ライン確認された。サザンプロット解析の詰果により正しい大きさと組換えの3こるトランスジーン金持つTgマウスは、9ラインであった。そのうち5ラインは、RT-PCR法によりmRNAが確認された。さらにノーザンブロット法にて、正しい大きさをもつマウスは、2ライン認められた。mRNAのsequenceをおこない、2ラインとも正しいことが明らかになった。また、蛋白質の産生をみるため、AxCANCreを2回投与後、さらにブースターとしてC14抗原を投与し、経時的に血清中のC14抗体価を測定した。C14抗原投与2週間後にTgマウスは、C14抗体価は2.5以上と陽性を示した。Cre/lox-P系スイッチング発現システムを用いることにより、強力にHCV蛋白質を発現させることが可能なため、非構造蛋白質領域のTgマウスを作製可能とした。このTgマウスによりHCV蛋白質の直接的細胞障害機序による肝細胞発癌のメカニズムと、CTLを介しておこる炎症と肝細胞の再生の操り返しで、発癌が生じるか否かの検討を今後計画している。

Hepatitis C (HCV) infection, chronic hepatitis, cirrhosis, hepatocellular carcinoma progression and infection HCV infection is caused by infection of host cells and cancer cells. DNA sequence analysis of Cre/lox-P gene sequence, HCV protein, especially NS3 protein sequence, HCV protein sequence analysis of non-structural protein sequence Chronic hepatitis patients serum extract from HCV, NS2 domain, NS5a domain, Cre/lox-P domain. The PCR method was used to confirm the identity of the virus. The results of the analysis are as follows: 1. mRNA was identified by RT-PCR. In addition to the above, it is also possible to use the following methods: The mRNA sequence is the same as the mRNA sequence. C14 antibody in serum was determined after 2 rounds of protein production and administration. C14 antigen and 2 weeks after the Tg, C14 antibody more than 2.5 Cre/lox-P system is a new type of HCV protein. It can be produced in the field of non-structural protein. The Tg of HCV protein is related to the direct cellular damage mechanism of HCV protein, such as liver cancer development, CTL, inflammation, liver regeneration, and future planning.

项目成果

Takoji Wakita: "Efficient Conditional Transgene Expression in Hepatitis C Virus cDNA Transgenic Mice Mediated by the Cre/lox-P system" The Journal of Biological Chemistry. Vol273 No.15. 9001-9006 (1998)

Takoji Wakita：“Cre/lox-P 系统介导的丙型肝炎病毒 cDNA 转基因小鼠的高效条件转基因表达”《生物化学杂志》。

T.Wakita: "Effecient Conditional Transgeru Expression in Hepatitis C virus cDNA Trangene Mice Mediated by the Cre/lox P sys" J.of Biological Chemistry. 273(in press). (1998)

T.Wakita：“Cre/lox P sys 介导的丙型肝炎病毒 cDNA 转基因小鼠中有效的条件性转基因表达”J.of Biological Chemistry。