レトロウイルスベクターを用いたB型肝炎動物モデルの作成と,その発症機序の解析

逆转录病毒载体乙型肝炎动物模型的建立及其发病机制分析

基本信息

  • 批准号:
    08770400
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.58万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
  • 财政年份:
    1996
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1996 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

レトロウイルスベクターであるLXSNは、そのなかにXと呼ばれる遺伝子を有し、その上流にクローニングサイトとを持っている。クローニングサイトには、EcoRIと、HindIIIの酵素切断部位がある。そこで、HBVのcore領域とenvelope領域のそれぞれを含むプライマーを作成した。(HBV-cl:5'-AAGCTTATAAATTGGTCTGCGCACCAGCA,nt.1789-nt.1811,HBV-c2:GAATTCTGTAGAGGAATAAAGCCCCGTAA,nt.2510-nt.2488,HBV-e1:5'-AAGCTTGGTCACCATATTCTTGGGAACAA,nt.2821-nt.2843,HBV-e2:5'-GAATTCCAATTCTTTGAGATACTTTCCAA,nt.1000-nt.978)この2組のプライマーには、それぞれの両端に、EcoRIとHindIIIの認識配列を付加してある。これらのプライマーを用いて、すでにクローニングしてある、HBV株(adwR9)をテンプレートとしてPCR反応を行い、その産物をアガロースゲルに流した後精製し、LXSNに組み込んだ。その後、このウイルスベクターを増殖させ、感染実験に必要な量の、コンストラクトを得た。まず本研究では、基礎実験として、in vitroで肝臓由来の細胞に感染し、ウイルス蛋白、この場合は、HBVのcoreとenvelopeの蛋白を発現するかどうかを調べた。感染には、HepG2細胞を用いた。この結果、このコンストラクトを感染させた細胞では、まず培養上清中にHBs抗原とHBc抗原を分泌した。また、感染させた細胞のcell lysateのWestern blotの結果、期待されたサイズのcore蛋白とenvelope蛋白を検出した。これらの結果より、本研究で作成したHBV蛋白を組み込んだレトロウイルスベクターは、in vitroで肝臓由来の細胞に感染し、ウイルス蛋白を発現させることがわかった。次に、in vivoで、マウスに感染させ、肝臓での発現を調べる計画である。
LXSN is the most popular language in the world. It is the most popular language in the world. There are many enzyme cleavage sites such as Kourona, EcoRI, and HindIII. The core field of HBV and the envelope field of HBV are composed of three parts. (HBV-cl:5'-AAGCTTATAAATTGGTCTGCGCACCAGCA, nt.1789-nt.1811,HBV-c2: GAATTCTGTAGAGGAATAAAGCCGTAA, nt.2510-nt.2488,HBV-e1:5'-AAGCTTGGTCACATATTGGGAACAA, nt.2821-nt.2843,HBV-e2:5'-GAATTCCAATTTGAGATACTTTCCAA, nt.1000-nt. 978) In this case, HBV strain (adwR9) should be treated with PCR, and all products should be refined after purification. LXSN should be prepared. After the infection, the necessary amount of infection, and the number of cases. This study is based on the study of HBV core envelope protein expression in vitro and in vivo. HepG2 cells were infected. As a result, HBs antigen and HBc antigen were secreted from culture supernatant of infected cells. Western blot results of cell lysate from infected cells, expected core protein and envelope protein detection The results of this study were as follows: HBV protein group was established in vitro, and HBV protein was developed in vitro. In vivo, infection, liver development, etc.

项目成果

期刊论文数量(1)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Kato,T,et al.: "A Melecular analysis of viral persistena in surface antigen-negative chronic nepatitis B." Hepatology. 23. 389-395 (1996)
Kato,T,et al.:“表面抗原阴性慢性乙型肝炎中病毒持久性的分子分析。”
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    0
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  • 通讯作者:
    加藤 純子

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