リボザイム(RNA酵素)を活性化するタンパク質因子の作成とその機能解析

激活核酶（RNA酶）的蛋白质因子的创建及其功能分析

• 批准号: 09780631
• 负责人: 井川 善也
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780631/
• 关键词: リボザイム; RNA; タンパク質; 活性化

RNA酵素であるグループIイントロン・リボザイム(以下GIリボザイムと略す)はタンパク酵素に匹敵する高度な機能と触媒活性を有し、基質認識部位、反応中心、活性化部位等の独立した機能単位の集積として構成されている。GIリボザイムには自己の分子内に活性化部位を有するものとは異なり,タンパク質成分を活性化因子として要求するものも知られている。GIイントロン以外にもRNaseP,リボゾーム,スプライセオソーム等,遺伝子発現に重要な因子の多くが,RNA-タンパク質複合体として機能していることが知られている。この計画では、GIリボザイムを基本因子とみなし、その機能と活性を特異的に制御するタンパク因子を,新規な手法を用いて人工的に作成し、その作用機構の解明を行うことを試みた。具体的にはβガラクトシダーゼ遺伝子中にGIイントロンを含み、イントロンが効率良くスプライシングを受けた場合のみ、遺伝子が発現するようにデザインされたプラスミドを構築した。このプラスミドを,多数の異なるポリペプチドを発現できるようにデザインした発現ライブラリーと共に大腸菌に導入した。これら二種のプラスミドを導入された大腸菌を炭素源としてラクトースを含んだ培地で培養すると、GIイントロンを活性化できるポリペプチドを導入された大腸菌のみが優先的に増殖する.この性質を利用し,優先的に増殖した大腸菌からポリペプチドをコードするプラスミドを回収することによりGIイントロンの活性を促進できるポリペプチドを数種類得ることができた.現在それらのポリペプチドを精製しin vitroのアッセイ系を用いて生化学的特性を検討中である.

RNA enzyme is composed of independent functional units such as substrate recognition sites, reaction centers, and activation sites. The active parts of the GI molecule are different from the active parts. In addition to GI protein, RNAP, RNA, RNA. This project is based on the basic factors of GI, GI, GI In particular, in the case of β-rays, the GI element is included in the matrix, and the matrix is constructed in the matrix. The most common type of bacteria is Escherichia coli. The introduction of two kinds of E. coli as carbon source, including culture, GI and activation, and the introduction of E. coli as preferential culture. The nature of this is to promote the growth of E. coli, and to promote the growth of E. coli. Now, we have to refine the system in vitro and apply it to biochemical properties.

项目成果

Yoshiya Ikawa: "A conserved motif in group IC3 introns is a new class of GNRA receptor" Nucleic Acids Research. 27(印刷中). (1999)

Yoshiya Ikawa：“IC3 内含子中的保守基序是一类新的 GNRA 受体”《核酸研究》27（出版中）。

Yoshiya Ikawa: "Trans-activation of the Tetrahymena group I intrun ribozyme via a non-native RNA-RNA interaction" Nucleic Acids Research. 27(印刷中). (1999)

Yoshiya Ikawa：“通过非天然 RNA-RNA 相互作用对四膜虫 I 组内核酶进行反式激活”，《核酸研究》27（出版中）。

Y.Ikawa, H.Oda, H.Shiraishi, and T.Inoue: "Long-range interaction between the P2.1 and P9.1 peripheral domains of the Tetrahymena ribozyme" Nucleic Acids Research. 25,No.9. 1761-1765 (1997)

Y.Ikawa、H.Oda、H.Shiraishi 和 T.Inoue：“四膜虫核酶 P2.1 和 P9.1 外围结构域之间的长程相互作用”核酸研究。

Y.Ikawa, A.Okata, H.Imahori, H.Shiraishi, and T.Inoue: "Identification of the Nucleotides in the A-Rich Bulge of the Tetrahymena Ribozyme Responsible for an Efficient self-splicing Reaction." The Journal of Biochemistry. 122. 878-882 (1997)

Y.Ikawa、A.Okata、H.Imahori、H.Shiraishi 和 T.Inoue：“鉴定负责高效自剪接反应的四膜虫核酶富含 A 的凸起中的核苷酸。”

Yoshiya Ikawa: "Long-range interaction between the P2.1 and P9.1 peripheral domains of the Tetrahymena ribozyme" Nucleic Acids Research. 25. 1761-1765 (1997)

Yoshiya Ikawa：“四膜虫核酶 P2.1 和 P9.1 外围结构域之间的长程相互作用”核酸研究。