タンパク質のミトコンドリア標的化に必要なHsc70/HSDJシャペロン系の解析

线粒体靶向蛋白质所需的 Hsc70/HSDJ 伴侣系统分析

• 批准号: 09780658
• 负责人: 寺田 和豊
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780658/
• 关键词: ミトコンドリア; 分子シャペロン; hsc70; DnaJ; オルニチントランスカルパミラーゼ; ルシフェラーゼ; オルニチントランスカルバミラーゼ

サイトソルの分子シャペロンであるhsc70は、パートナーシャペロンとしてDnsJホモログを必要とする。哺乳類のサイトソルにはdj2(HSDJ/hdj-2)、dj1(hsp40/hdj-1)、dj3(DNJ3/CPR3)が存在する。一方、真核生物のサイトソルにGrpEホモログは存在しないものと考えられてきたが、最近hsc70に直接結合する因子として同定されたRAP46/BAG1-MはATP/ADP交換活性をもつと提唱されている。昨年度、代表者はdj2の生化学的な特徴を調べるとともに、タンパク質のミトコンドリア輸送と変性させたホタル・ルシフェラーゼの巻き戻しにdj1とdj2のどちらのDnaJホモログが必要なのか検討した。その結果hsc70-dj2シャペロン系がタンパク質の巻き戻しとミトコンドリアへのタンパク質輸送を中心的に担うシャペロン系であることを明らかにした(Teradaetal.JCB1997)。今年度は、以下の実験を行った。1. hsc70-dj1系あるいはhsc70-dj2系によるATPase活性の測定を行い、いずれのDnaJホモログによってもhsc70のATPase活性の増大がみられることを確認した。2. dj1、dj2のHeLa細胞内における分布を間接蛍光抗体法によって調べた。前者は核を中心に存在し、後者はサイトソルを中心に存在していた。また、熱ストレスによって細胞内分布が変わるか調べた。3. 抗体レジンを用いたdepletion-readdition系をdj3やRAP46についても確立するために、それぞれのヒトcDNAをRT-PCR法によって調製し、大腸菌あるいは昆虫細胞を用いて組換えタンパク質の発現精製を行った。現在抗体を作成中である。4. Northem法により、dj1,dj2,dJ3,RAP46の発現に臓器特異性があるか調べた。

The molecule is called hsc70, the molecule is necessary, the DnsJ is necessary. Dj2 (HSDJ/hdj-2), dj1 (hsp40/hdj-1) and dj3 (DNJ3/CPR3) exist in mammalian animals. On the one hand, eukaryotes are known for their GrpE activity. Recently, hsc70 was directly combined with other factors to determine the activity of RAP46/BAG1-M interaction. Last year, the representative of dj2 biochemistry said that it was necessary to send information about sex, sex, dj2, DnaJ, and so on. The results show that the hsc70-dj2 system is responsible for the health care of the transportation center. It is the information system of the transport center. It is the information system (Teradaetal.JCB1997). In the current year, the following will be held in the first place. 1. Hsc70-dj1 is related to the hsc70-dj2 system. The ATPase activity is measured. The DnaJ activity is measured. The ATPase activity is confirmed by the hsc70. 2. Dj1 and dj2 HeLa. The distribution of intracellular antigens was connected with the photoantibody method. In the former, there is a nuclear center, and in the latter, there is a center in the core. The distribution of cells in the cell is similar to that of the cell. 3. The antibodies were detected by depletion-readdition, cDNA, and insect cells by depletion-readdition, cDNA, and Elisa, respectively. Now the antibody is in the process of being made. 4. The Northem method and the dj1,dj2,dJ3,RAP46 method show that the device has special characteristics.

项目成果

Namchai,C.: "Characterization of the novel mitochondrial protein import component,Tom34 in mammalian cells." J.Biochem.印刷中.

Namchai, C.：“哺乳动物细胞中新型线粒体蛋白输入成分 Tom34 的表征”，正在出版。

Yano, M.et al.: "Visualization of mitochondrial protein import in cultured mammalian cells with green fluorescent protein and effects of overexpression of the human import receptor Tom20." The Journal of Biological Chedmistry. 272(13). 8459-8465 (1997)

Yano, M.等人：“用绿色荧光蛋白可视化培养的哺乳动物细胞中线粒体蛋白的输入以及人类输入受体 Tom20 过度表达的影响。”

Mori,M.: "Mitochondrial protein import in animals." Biochem.Biophys.Acta. 1403(1). 12-27 (1998)

Mori,M.：“动物体内线粒体蛋白的输入。”