染色体外発現ベクター系を用いた胚幹細胞の分化を規定する遺伝子の検索

使用染色体外表达载体系统寻找调节胚胎干细胞分化的基因

• 批准号: 09780655
• 负责人: 丹羽 仁史
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780655/
• 关键词: 胚幹細胞(ES細胞); 染色体外発現ベクター; 分化; 胚幹細胞

本研究は当初、cDNA発現ライブラリーを染色体外発現ベクターを用いて構築し、この中からES細胞の分化を誘導するクローンを機能的に選択し、その遺伝子を単離・解析することを目標としていた。このために20万個のクローンからなるライブラリーを作製し、そのスクリーニングを行ったが、この過程で極少数の分化細胞からベクターを回収する効率の悪さが問題となった。この点を克服すべく条件検討や方法の改良を試みたが、結局現在に至るまで顕著な改善は得られていない。一方、年々増加する分化関連遺伝子に関する情報の増加に基づき、作製したライブラリーからまず候補遺伝子を含むものを単離し、これらに関して個々に検討を加えた。この結果、転写因子COUP-TFとCdx2が、それらの強制発現により、ES細胞を栄養外胚葉様細胞へと分化させることを見いだした(日本発生生物学会第32回大会にて発表予定)。また、これまで用いてきた染色体外発現ベクターpHPCAGGSに改良を加え、染色体に組み込まれた形でも高発現を示す多目的発現ベクターpPyCAGIZ,pPyCAGIPを開発し、これらを用いてドミナントネガティブ型STAT3の強制発現がES細胞では分化を誘導するがEC細胞ではなんら効果を示さないこと、および、これとは逆にc-junの強制発現はEC細胞においてのみ分化を誘導することを見いだした(Niwa H.,et al,Genes&Dev.1998、および日本癌学会年会にて発表)。今後は以上の成果に基づき、ES細胞の分化機構の解析を更に進めるとともに、ライブラリースクリーニングの効率的実施のための方法の開発を行うべきと考えている。

This study aims to construct and analyze cDNA expression vectors for the purpose of inducing ES cell differentiation and functional selection. This is a problem for 200,000 differentiated cells in the process of differentiation. This point is to overcome the condition of the search and improve the method, the result is now to improve the results A party, year increase in the number of related information related to the increase in the number of basic information, control of the number of candidate information, including the number of related information related to the increase in the number of The results showed that the expression factor COUP-TF and Cdx2 were related to stress development and differentiation of ES cells. pHCAGGS, pPyCAGIZ, pPyCAGIP, pPyCAGGS, pPyCAGIZ, pPyCAGIP, pPyCAGIZ, pPyCAGIZ,pPyCAGIP, pCAGIP, pPyCAGIZ, pPyCAGIZ,pPyCAGIP, pCAGIZ,(Niwa H., et al, Genes & Dev. 1998, presented at the annual meeting of the Japanese Cancer Society). In the future, the development of methods for the analysis of ES cell differentiation mechanism based on the above results will be further studied.

项目成果

Niwa,H.et al.: "Selfrenewal of pluripotent embryonic stem cells is mediated via activation of STAT3" Genes and Development. 12. 2048-2060 (1998)

Niwa, H. 等人：“多能胚胎干细胞的自我更新是通过 STAT3 的激活介导的”基因和发育。

丹羽仁史: "幹細胞とは何か-ES細胞を用いたアプローチ-" 細胞工学. 16・12. 1744-1751 (1997)

Hitoshi Niwa：“什么是干细胞？使用 ES 细胞的方法。”16・12（1997）。

Hotta,M.et al.: "Parcreatic β-cell-specific expression of thioredoxin,an antioxidative and antiapoptotic protein,prevents autoimmune and streptozotocin-induced diabetes" Journal of Experimental Medicine. 188. 1445-1451 (1998)

Hotta, M. 等人：“硫氧还蛋白（一种抗氧化和抗凋亡蛋白）的胰岛 β 细胞特异性表达可预防自身免疫和链脲佐菌素诱导的糖尿病”实验医学杂志 188. 1445-1451 (1998)。

Nichols,J.et al.: "Formation of pluripotent stein cells in the mammalian embryo depends on the Pal transcription factor Oct4" Cell. 95. 379-391 (1998)

Nichols,J.等人：“哺乳动物胚胎中多能斯坦细胞的形成取决于 Pal 转录因子 Oct4”细胞。