脳内における遺伝子の部位特異的な発現制御機構に関する検討

脑内基因位点特异性表达调控机制研究

• 批准号: 09780709
• 负责人: 小林 正明
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Toho University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780709/
• 关键词: カルシウム結合蛋白質; EF-ハンド; 脳; 海馬; 転写・発現; トランスジェニック・マウス

申請者らは神経系に特異的に発現するEFハンド型カルシウム結合蛋白質の一群を見い出し、神経特異カルシウム結合蛋白質ファミリーと命名し解析を進めている.これらの分子はいずれも脳内分布に強い偏在性をもち、なかでもヒポカルシンは記憶形成と深く関わっているといわれる大脳の海馬錐体細胞に特徴的に存在している.本研究課題では、ヒポカルシン遺伝子上の発現制御領域を解析し、脳内での発現を海馬神経細胞に限定可能なトランスジーン・ベクターの開発を目的とした.平成9年度には、in vitro転写系を用いてヒポカルシン遺伝子の発現制御領域について詳細に検討した.ラット脳より核内蛋白質を調整し、様々な欠損・変異を導入したヒポカルシン遺伝子をテンプレートとしてin vitro転写を行い、転写産物の絶対量をcompetitiveRT-PCRにより定量した.ヒポカルシン遺伝子の5'上流2000bp以上の領域にサイレンサーの存在が認められ、上流300〜500bpにはエンハンサーの存在が認められた.また、第1イントロンの下流域中にはストロング・エンハンサーの存在が認められた.平成10年度には、ヒポカルシン遺伝子の第1エキソンにLacZを導入したトランスジーン・ベクターを構築し、トランスジェニック・マウスの作成を行った.ゲノミック・サザンブロットによりトランスジーンが確認された5系統についてβ-galactosidaseの発現を検討したところ、いずれも海馬特異的で、特に歯状回顆粒細胞に特徴的な発現が認められた.ヒポカルシンの発現はCA1錐体細胞に特徴的であることから、海馬内での発現領域に逆転現象が見られた.現在、脳内での発現部位におよぼすヒポカルシシ遺伝子の第1イントロンの影響について検討を行っている.

The applicant is responsible for the identification of a group of proteins that bind to a group of proteins, and the names of the proteins that bind to the EF gene are analyzed. There is a strong bias in the distribution of molecules, and there is a strong presence in the cells of the sea. The purpose of this study is to analyze the control system in the field, and to realize that there is a limit to the number of cells in the sea in this study. the purpose of this study is to improve the quality of life. In Pingcheng 9, the in vitro system was written in terms of the use of information technology, information technology, and information technology. The contents of the protein in the nucleus were not adjusted, and the contents of the protein in the nucleus were measured. The contents of the in vitro were measured, the contents were measured, and the contents were measured. There is a confirmation that there is a high-end 2000bp in the field above 5', and that there is a high-end 300-500bpg in the upper class. In the lower basin, there is a recognition of the presence of a large amount of water in the lower basin. In the year of Pingcheng, the first one was called LacZ, and the first was made into a row. Please confirm that your 5-system beta-galactosidase system is responsible for your health, health care, and special health care. You can see that there is a special situation in the CA1 system, and that in the sea, there is an inverse situation in the field. Now, you can see that there is a problem in the area where you can see that there is a problem in the first part of the day.

项目成果

Kobayashi M.: "Isolation of two human cDNAs,HLP3 and HLP4,homologous to the neuron-specific calcium-binding protein genes" DNA Sequence. 8. 1-6 (1997)

Kobayashi M.：“分离两种人类 cDNA，HLP3 和 HLP4，与神经元特异性钙结合蛋白基因同源”DNA 序列。

小林正明: "神経特異カルシウム結合蛋白質" 蛋白質・核酸・酵素. (印刷中). (1998)

Masaaki Kobayashi：“神经特异性钙结合蛋白”蛋白质、核酸和酶（出版中）。

Kobayashi M,et al: "Isolation of two human cDNAs.HLP3 and HLP4, homologous to the neuron-specific calcium-binding protein genes." DNA Sequence. 9. 171-176 (1998)

Kobayashi M,et al：“分离出两种人类 cDNA。HLP3 和 HLP4，与神经元特异性钙结合蛋白基因同源。”

小林正明ら: "神経特異Ca^<2+>結合蛋白質." 蛋白質核酸酵素. 43. 164-167 (1998)

Masaaki Kobayashi 等：“神经特异性Ca 2+ 结合蛋白。”蛋白质核酸酶。43. 164-167 (1998)

Miwa N,et al.: "Purification and molecular cloning of a novel calcium-binding protein.p26olf, in the frog olfactory epithelium." Biochem.Biophys.Res.Commun.251. 860-867 (1998)

Miwa N 等人：“青蛙嗅觉上皮细胞中新型钙结合蛋白 p26olf 的纯化和分子克隆。”