海馬特異的カルシウム結合蛋白質:ヒポカルシンの生理機能の解析

海马特异性钙结合蛋白：hypocalcin的生理功能分析

• 批准号: 07780706
• 负责人: 小林 正明
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Toho University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780706/
• 关键词: ヒポカルシン; カルシウム結合蛋白質; 海馬; 神経細胞; ゲノム遺伝子; 転写調節

ヒポカルシンは、申請者らが見い出した大脳の海馬に特徴的に存在する神経特異的カルシウム結合蛋白質で、カルシウム濃度の生理的変動を感知して神経細胞内の情報伝達系の効率を調節していると考えられている。今回、ヒポカルシン遺伝子の転写調節機構を解析する目的で、ラット白血球由来ゲノムDNAライブラリーより約13kbpのヒポカルシン遺伝子を単離した。ラット・ヒポカルシン遺伝子は、約13kbpのゲノム遺伝子中に3個のエキソンに分断されて存在していた。ラット脳の各領域から得た全RNAについて、プライマー伸長反応およびS1マッピングを行ったところ、海馬および大脳皮質では開始コドン上流228bp(T)からヒポカルシンmRNAの転写が開始されていることが明らかとなった。ヒポカルシンの開始コドン上流域約1.5kbpの塩基配列を決定したところ、AP1,NF1およびHSTFなどの転写調節因子の結合配列が認められ、転写開始点上流80bp近辺にはCAATボックスが存在していた。レポーターとしてルシフェラーゼ遺伝子を用い、C6細胞、NG108-15細胞,SH-SY5Y細胞,および胎生20日令のラット脳の初代培養細胞で一過性発現実験を行い、開始コドン上流域約1.5kb中のプロモーター活性を検出した。いずれの細胞でもβactinは強いプロモーター活性を示したが、ヒポカルシン遺伝子には、初代培養細胞でのみ弱いプロモーター活性を認めた。このことから、ヒポカルシン遺伝子のプロモーターは、ごく限られた神経細胞、おそらくは分化した海馬の神経細胞においてのみ活性を発現し得る転写調節機構を持つと考えられる。

In addition, the applicant can detect the presence of hippocampal characteristics in the brain, detect physiological changes in the concentration of neuro-specific proteins, and regulate the rate of information transmission in the brain cell. In this paper, we analyze the regulatory mechanism of DNA sequence in human leukocyte. The DNA sequence of human leukocyte is about 13kbp. Three of the 13kbp DNA fragments were isolated from the DNA fragment. All regions of the hippocampus were isolated from the full RNA sequence, and all regions of the hippocampus were isolated from the full RNA sequence, and all regions were isolated from the full RNA sequence. The combination of CAAT and AP1, NF1 and HSTF in the upstream region of about 1.5kbp at the beginning of the writing process is recognized. CAAT exists in the upstream region of 80bp at the beginning of the writing process. The transient expression of the protein in C6 cells, NG108 -15 cells, SH-SY5Y cells, and primary cultured cells at 20 days of gestation was in progress. The activity of the protein in the 1.5 kb upstream region of the mouse was detected.β-actin in the cells showed strong and weak activity in the primary culture cells. In this case, the activity of neurons in hippocampus cells is regulated by the regulation mechanism.

项目成果

Saitoh S., et al: "The development of neural visinin-like Ca2+-binding protein 2 immunoreactivity in the rat neocortex and hippocampus." Neurosci. Res.23. 383-388 (1995)

Saitoh S. 等人：“大鼠新皮质和海马中神经维西宁样 Ca2 结合蛋白 2 免疫反应性的发展。”