小脳の形態形成に関わるフォスファターゼ阻害因子の研究

磷酸酶抑制剂参与小脑形态发生的研究

• 批准号: 09780725
• 负责人: 田岡 万悟
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780725/
• 关键词: cerebellum; developmene; protein; LANP; development

本年度は科研費交付申請書に記したとおり、(1)II・III型LANPのクローニングと一次構造決定、(2)プロテインフォスファターゼ阻害の活性測定系の確立、(3)サブタイプの小脳における発現時期や局在の解析(4)プロテインフォスファターゼとの結合活性の解析を行った。(1)についてはRT-PCRを中心に解析を行っていたが、計画を変更し、in silico cloning的な手法を取り入れて解析を行った。cDNAは、IMAGE consortiumより入手し、それらのcDNAがLANP II・III型のcDNAであることを制限酵素地図から確認した。LANP II・IIIはそれぞれ、272、260アミノ酸からなり、ロイシンリッチリピート構造の5回の繰り返しと酸性アミノ酸クラスター構造、核移行シグナルを持っていることを確認した。(2)については、リン酸化された基質をフォスファターゼで脱リン酸化し、その際に、発現させたLANPファミリーに属するタンパク質を反応液に加え、反応を解析した。GST-LANP IにはHong-Guoらの報告に比べ30分の1程度の活性があることを確認している。他のサブタイプについては実験が進行中である。(3)についてはプローブとなるLANP II・III型のcDNAの精製が進行中であり、結果は3月中に得られるものと思われる。(4)については、GST-LANP Iの融合タンパク質を精製し、組織抽出液と混合して、グルタチオン樹脂に結合、沈降させ、SDS-PAGE後に免疫化学的な解析を行った。抗フォスファターゼ抗体による陽性のシグナルは得られず、直接的な結合は確認できなかった。LANP II・皿についても実験が進行している。

This year, the application for submission of scientific research fee includes: (1) determination of primary structure of type II and III LANP;(2) establishment of activity measurement system for resistance to toxicity;(3) analysis of current situation during the development period of type II and III LANP; and (4) analysis of binding activity of type II and III LANP. (1)RT-PCR center analysis, planning, updating, in silico cloning, method acquisition, analysis cDNA, Image consortium, cDNA, LANP type II, III cDNA, cDNA, restriction enzyme, cDNA, cDNA, cDNA LANP II. III: 272, 260, 272, (2)In addition, the reaction solution was analyzed in the presence of a solvent and a solvent. GST-LANP I reported a 30-point increase in activity. He is in the middle of the game. (3)The purification of LANP type II and III cDNA is in progress, and the result is in March. (4)The fusion protein of GST-LANP I was purified, the tissue extract was mixed, the resin was combined, the precipitation was performed, and the immunochemical analysis was performed after SDS-PAGE. Anti-virus antibodies are positive, and direct binding is confirmed. LANP II·

项目成果

田岡万悟ら: "Leucine-rich Acidic Nuclear Proteinとトリプレットリピート病" 脳の科学. 20. 1123-1128 (1998)

Mango Taika 等人：“富含亮氨酸的酸性核蛋白和三联体重复疾病”《脑科学》20. 1123-1128 (1998)。