小脳の形態形成に連関したシグナル伝達機構の研究

小脑形态发生相关信号转导机制研究

• 批准号: 07780701
• 负责人: 田岡 万悟
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780701/
• 关键词: cerebellum; development; protein; V-1; LANP

V-1とLeucine rich Acidic Nuclear Protein(LANP)は小脳の成熟過程で一時的に発現量が増加するタンパク質である。V-1とLANPはその構造や分布、生後変化のパターンから出生後の小脳の発達に関わるシグナル伝達機構に関与していることが示唆されているが、分子レベルでの作用機構の解明には至っていない。そこで、小脳の発達に関わるシグナル伝達機構の中でのV-1とLAMPの役割を明らかにすることを目的として、V-1とLANPの結合タンパク質を検索した。PCR法によってV-1とLANPのモジュール部分及び全長のcDNAを増幅した。真核生物の転写因子であるGAL4のDNA結合ドメインを持つ酵母の発現ベクターにcDNAを組み込んだ。相互作用解析のために必要なcDNAライブラリーは、当初の予定では作製することになっていたが、独立クローン数の多いライブラリーの作製が困難なため、clontech社から購入した。酵母内で活性化ドメインとライブラリー由来タンパク質との融合タンパク質と、結合ドメインとモジュールの融合タンパク質を同時に発現させ、その相互作用を酵母内のlacZとHIS3の発現を指標として選択した。現在までにスクリーンした2x105クローンから2つのクローンが単離できている。DNA断片の入ったベクターを大腸菌に形質転換後、増幅し、現在挿入DNA断片の塩基配列決定に至ろうとしている(3月15日現在)。今年度中には交付申請書に書かれた目標を達成できる見込みである。成果は本年の生化学会にて報告の予定である。

V-1 and Leucine rich Acidic Nuclear Protein(LANP) increase in quantity and quality during maturation. V-1 and LANP have structural distribution, postnatal transformation, postnatal development, postnatal development, postnatal development, The V-1 and LAMP in the transmission mechanism are connected to the V-1 and LAMP. PCR amplification of partial and full-length cDNA of V-1 and LANP Eukaryotic DNA binding factor GAL4 gene expression in yeast Interaction analysis is necessary for the determination of cDNA sequences, and it is difficult for the determination of cDNA sequences to be performed independently. In yeast, the activation of the enzyme and the interaction between the enzyme and the fusion enzyme are the indicators for the simultaneous occurrence of lacZ and HIS3. Now it's 2x105. It's 2x105. DNA fragment insertion into E. coli after morphological change, increase in amplitude, and now into DNA fragment alignment determination until March 15 (present) This year's application is being delivered. The results of this year's biochemical society report are scheduled.