出芽酵母における栄養源認識機構の解明

酿酒酵母营养源识别机制的阐明

• 批准号: 10760050
• 负责人: 玉置 尚徳
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10760050/
• 关键词: グルコース; Gタンパク; レセプター; 出芽酵母; シグナル伝達

申請者は現在までに、Two-Hybrid法を用いて酵母Saccharomyces cerevisiaeにおいて栄養源のシグナル伝達に関与していると考えられている3量体GTP結合タンパク質αサブユニットであるGpa2タンパク質と相互作用するタンパク質遺伝子のスクリーニングを行い、膜タンパク質をコードしていると考えられる遺伝子GPR1(G-protein coupled receptor)をクローニングした。GPR1遺伝子は961アミノ酸を持つ7回膜貫通型タンパク質をコードしており、典型的なGTP結合タンパク質とカップリングする受容体タンパク質であると考えられた。本年度においては、Gpr1pを介するシグナル伝達経路の解明を目的として実験を行った。昨年度の研究結果より、Grp1pは、グルコースを認識して細胞内cAMPレベルの調節を行うグルコースレセプターである可能性が示唆された。出芽酵母Saccharomyces cerevisiaeでは、細胞内cAMPレベルが上昇するとcAMP依存的キナーゼの活性化が起こり細胞がG1期に停止できなくなるため熱に対して感受性となることが知られている。そこで、cAMP経路に関与する因子の遺伝子破壊株の構築を行い、熱に対する感受性を調べた。その結果、GRP1遺伝子破壊株、GPA2遺伝子破壊株では、野生株と比べて熱に対して耐性となり、逆に多コピープラスミドにて遺伝子を導入した場合には熱感受性となった。さまざまな遺伝学的、生化学的解析の結果Gpr1pからのシグナルは、Gpa2pを介してアデニル酸シクラーゼの活性化を促していることが明らかになった。

The applicant currently uses yeast Saccharomyces for the Two-Hybrid method cerevisiaeにおいて栄脄元のシグナル伝达に关与していると考えられている3-quantity GTP combined with タンパク性αサブユニットであるGpa2タンパク性と INTERACTION するタンパク性性伝子 のスクリーニングを行い、目タンGPR1(G-protein) coupled receptor)をクローニングした. GPR1 缝子は961アミノ acid をhold 7-turn membrane through-type タンパクquality をコードしており, typical The type of GTP binds to the GTP-binding receptor GTP. This year's においては、Gpr1pを解するシグナル伝大経路の解明をpurposeとして実験を行った. The results of last year's research revealed that the intracellular cA of より, Grp1p and グルコースを was recognized MPレベルのregulationを行うグルコースレセプターであるpossibilityがshows instigationされた. Budding Yeast Saccharomyces cerevisiae, intracellular cAMP rise and cAMP-dependent cAMP-dependent activity The cells are in the G1 phase and the cells are in the G1 phase.そこで、cAMP経路に关与するfactor的の伝子波壊组のconstruct を行い、热に対するsensitivity を Adjustment べた. The results of その, GRP1 legacy 伝子波壊 strain, GPA2 legacy 伝子波壊 strain では, wild strain と比べて热に対してPatience となり, inverse に多コピープラスミドにて伝子を Import したoccasion にはThermosensitivity となった. Gpr1pからのシグナルは、Gpa 2p してアデニル acid シクラーゼのactivation をstimulate していることが明らかになった.

项目成果

Tamaki,H.,et al.: "GPR1 regulates filamentous growth through FLO11 in yeast Saccharomyces cerevisiae"Biochem.Biophys.Res.Common.. 267. 164-168 (2000)

Tamaki,H.,et al.：“GPR1 通过 FLO11 在酿酒酵母中调节丝状生长”Biochem.Biophys.Res.Common.. 267. 164-168 (2000)

Tamaki,H.,Yamamoto,K.,Kumagai,H.: "Expression of two glutathione S-transferase genes in the yeast Issatchenkia orientalis is induced by o-dinitrobenzene during cell growth arrest"J.Bacteriology. 181. 2958-2962 (1999)

Tamaki,H.、Yamamoto,K.、Kumagai,H.：“在细胞生长停滞期间，邻二硝基苯诱导东方伊萨酵母中两个谷胱甘肽 S-转移酶基因的表达”J.Bacteriology。

Yun,C.-W.,Tamaki,H,nakayama,R.,Yamamoto,K.Kumagai: "Gprlp,a putative G-protein coupled receptor,regulates glucose dependent cellular cAMP level in yeart Saccharomyces cerevisiae" Biochem.Biophys.Res.Commun.252. 29-33 (1998)

Yun,C.-W.,Tamaki,H,nakayama,R.,Yamamoto,K.Kumagai：“Gprlp，一种推定的 G 蛋白偶联受体，调节酿酒酵母中葡萄糖依赖性细胞 cAMP 水平” Biochem.Biophys.Res