新規な補酵素TOPAキノンを含むアミン酸化酵素の活性発現機構の解明

阐明含有新型辅酶TOPAquinone的胺氧化酶的活性表达机制

• 批准号: 08760078
• 负责人: 玉置 尚徳
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760078/
• 关键词: TOPA guinone; amine oxidase

アミン酸化酵素(AO)は、新規なキノン化合物tri-hydroxyphenylalanine(TOPA)キノンを補酵素として有する。TOPAキノンの生成については、酵素分子内の特定のチロシン残基がAO分子内に配位している銅によって自動酸化されて生じる可能性が報告されている。本研究では、本酵素の活性発現のメカニズムを解明することを目的として、既にcDNAの得られているかびAspergillus niger由来の銅含有AOについて、AO分子内における銅結合リガンドと考えられるヒスチジン残基の同定及び他起源のAOと比較して高度に保存されているアミノ酸残基の役割について、遺伝子工学的手法を用いて解析を行った。AOにおける銅結合のリガンドとして以前より3つのヒスチジン残基の存在が予想されている。AOのヒスチジン残基のうちで他起源のAOとの相同性の高いもの4残基(His-4,His-377,His-433,His616)についてsite-dierected mutagenesisにより変異を導入してそれぞれのヒスチジン残基をアルギニン残基に置き換えた変異AOを作成した。その結果、変異酵素H377R、H433R、H616Rにおいては、酵素活性およびTOPAキノンの生成が認められず、これらアミノ酸残基が銅結合のリガンドあるいはTOPAキノン生成に重要な働きをすることが示された。また、他起源のAOとの比較を行い種を越えて高度に保存されているTOPAキノン近傍のアミノ酸残基(Thr-400,Asn-403,Tyr-404)についても同様にして他のアミノ酸(Thr→Ala,Asn→Gln,Tyr→Phe)に変換した変異を作成した。作成した変異酵素T400A、N403Q、Y404Fのいずれにおいても酵素活性およびTOPAキノンの生成が認められず、これらTOPAキノン近傍の保存されたアミノ酸残基が、本酵素活性発現に重要な役割をしていることが示された。

The acidifying enzyme (AO), the compound tri-hydroxyphenylalanine (TOPA), and the enzyme were isolated from the plant. The possibility of automatic acidification is reported in the report of the possibility of automatic acidification in the production of TOPA antigens, intramolecular ligands, intramolecular ligands, ligand-specific residues, intramolecular ligands, ligands. In this study, the activity of this enzyme shows that it is not only possible to determine the origin of cDNA, but also to determine the origin of acid residues in Aspergillus niger. The results of this study show that the activity of this enzyme is similar to that of this enzyme in this study, the results of this study show that the activity of this enzyme is similar to that of the enzyme in this study, the results of this study show that the activity of this enzyme is similar to that of the enzyme in this study, the results of this study show that the activity of this enzyme is similar to that of the enzyme in this study. The technique of sub-engineering is used to analyze the behavior of the line. The combination of the AO sequence and the sequence sequence indicates that there is a desired residue in the previous system. AO homology, 4 residues (His-4,His-377,His-433,His616), site-dierected mutagenesis, residues, AO residues, The results showed that H377R, H433R, H616R, TOPA, H616R, H377R, H433R, H616R, H377R, H433R, H616R, H616R, H377R, H433R, H616R, H616R, H433R, H616R, H433R, H616R, H616R, H433R, H616R, H616R His origin, AO, Ala,Asn, Gln,Tyr, Phe, Thr, Ala,Asn, acid, Phe, acid, acid, acid. Make the enzyme T400A, N403Q, Y404F, enzyme activity, TOPA activity, TOPA enzyme, TOPA enzyme, acid residue, acid residue, enzyme activity, and so on.

项目成果

Frebort,I.,Tamaki,H.,et al.: "Two distinct quinoprotein amineoxidases are induced by n-butylamine in mycelia of Aspergillus niger." Eur.J.Biochem.237. 255-265 (1996)

Frebort,I.,Tamaki,H.,et al.：“黑曲霉菌丝体中的正丁胺诱导两种不同的醌蛋白胺氧化酶。”