RasによるRafの活性化におけるRap1Aの阻害作用とその燐酸化による調節

Rap1A 对 Ras 激活 Raf 的抑制作用及其磷酸化调控

• 批准号: 10770062
• 负责人: 胡 長灯
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770062/
• 关键词: Ras; Rap1A; Raf-1; B-Raf; PLC

Rap1AはRasと類似の構造を持つ低分子量GTP結合蛋白質であり、RasによるRaf-1活性化を阻害する。我々は、Rap1AがRaf-1のcysteine-rich領域(CRR)に強く結合し、Raf-1、Rasと共に三者複合体を形成することを発見した。昨年度、プロテインキナーゼAによりRap1Aが燐酸化を受け、CRRの結合能力と三者複合体形成能力が失われることを証明した。燐酸化部位のセリンをグルタミン酸に置換したRap1A変異体は、Ras、Raf-1と共発現したところ、Raf-1活性化を阻害する能力も失っていた。さらに、細胞内でRap1A、Raf-1、Rasが三者複合体を形成することを確認した。Rap1AはRaf-1のホモログB-Rafに対して逆に活性化作用を持つことが知られていたが、B-RafのCRRについてRasおよびRap1Aとの結合強度を測定したところ、Raf-1とは対照的にRap1Aとの結合強度の昴進がなく、Rasと同程度であることを見い出した。また、Raf-1とB-Rafの間でCRRを交換したキメラを作成したところ、Rap1AはCRRの種類に依存してRafを阻害または活性化することがわかった。上記の結果は、Rap1AがRaf-1のCRRとの結合強度に基づき、Raf-1の活性化を制御していることを強く支持した。最近我々が発見した新しいRasエフェクターホスホリパーゼC(PLC-ε)の活性調節におけるRap1Aの役割を検討した。試験管内でPLC-εのRAドメインは活性型Rap1Aと強く結合した。さらに、細胞内でRap1Aとの共発現により、PLC-εが細胞質からRap1Aが局在する核周辺およびゴルジ小体へ移送され、ホスホリパーゼC活性が活性化されることを示し、Rap1Aのエフェクターである事を証明した。

Rap1A maintains a similar structure to Ras, which inhibits the activation of Raf-1 by low molecular weight GTP binding proteins. Raf-1 and Ras-1 are strongly combined in the cysteine-rich domain (CRR). Last year, Rap1A phosphorylation, CRR binding ability and complex formation ability were demonstrated. Phosphorylation of the site by acid substitution, Rap1A, Ras, Raf-1 and co-production, and inhibition of Raf-1 activation. It is confirmed that Rap1A, Raf-1 and Ras are formed in cells. The binding strength of Rap1A was measured by the method of Ras-1 and Raf-1. The binding strength of Rap 1A was measured by the method of Ras-1 and Raf-1. Raf-1, Raf-2, Raf-3, Raf-4, Raf-5, Raf-5, Raf-6, Raf-5, Raf-5, Raf-6, Raf-7, Raf-6, Raf-7, Raf-7, Raf-8, Raf-8, Raf-9, Raf-9 The above results show that the binding strength of RAP1A to Raf-1 and CRR is very strong, and the activation of Raf-1 is very strong. Recently, we have discovered a new approach to the regulation of Rap1A activity in Ras C(PLC-ε). PLC-ε RA in the test tube is active Rap1A and strong binding. In this paper, we demonstrate that Rap1A activity is activated by PLC-ε and Rap1A cytokinesis, nuclear periosome transfer, and activation of PLC-ε and Rap1A cytokinesis.

项目成果

Tomoyo Okada: "The strength of interaction at the Raf cysteine-rich region domain is a critical determinant of response of Raf to Ras family small GTPase"Molecular and Cellular Biology. 19・9. 6057-6064 (1999)

Tomoyo Okada：“Raf 富含半胱氨酸区域的相互作用强度是 Raf 对 Ras 家族小 GTP 酶反应的关键决定因素”《分子与细胞生物学》19·9（1999）。

Mikako Shirouzu: "Interations of the amino acid residue at position 31 of the c-Ha-Ras with Raf-1 and RalGDS" The Journal of Biological Chemistry. 273・13. 7737-7742 (1998)

Mikako Shirouzu：“c-Ha-Ras 31 位氨基酸残基与 Raf-1 和 RalGDS 的相互作用”《生物化学杂志》273・13 (1998)。

Fumi Shima: "Association with CAP forms a second Ras-binding site of yeast adenylyl cyclase which mediates activation by posttranslationally modified Ras protein"Molecular and Cellular Biology. 20・1. 26-33 (2000)

Fumi Shima：“与 CAP 的结合形成酵母腺苷酸环化酶的第二个 Ras 结合位点，通过翻译后修饰的 Ras 蛋白介导激活”《分子与细胞生物学》20·1。

Yoshiya Tanaka: "H-Ras signals to cytoskeletal machinery in induction of integrin-mediated adhesion of T cells"Journal of Immunology. 163. 6209-6216 (1999)

Yoshiya Tanaka：“H-Ras 向细胞骨架机制发出信号，诱导整合素介导的 T 细胞粘附”《免疫学杂志》。

Yasuhino Watri: "Identification of Ce-AF-6,a novel Caenorhabditis elegans protein,as a putative Ras effector" Gene. 224. 53-58 (1998)

Yasuhino Watri：“Ce-AF-6 的鉴定，一种新的秀丽隐杆线虫蛋白，作为假定的 Ras 效应子”基因。