ジフテリア毒素のエンドソーム膜通過における前駆体の存在の解析

白喉毒素内体膜通道中前体存在的分析

• 批准号: 10770127
• 负责人: 馬田 敏幸
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770127/
• 关键词: ジフテリア毒素; エンドソーム膜通過; 前駆体; clevage

動物細胞に侵入したジフテリア毒素はより生じた28kDのフラグメントが、毒素のフラグメントAのエンドソーム膜通過すなわち細胞毒性発揮のための前駆体であるかどうかを調べるために、プロテアーゼによる切断を阻害する試薬を使って、28kDのフラグメントの生成が毒性発現に必須であるかどうかを検討した。種々のプロテアーゼ阻害剤を使った28kDフラグメントの出現の阻害使用するプロテアーゼ阻害剤1.セリンプロテアーゼ阻害剤-PMSF,APMSF,chymostatin,aprotinin2.システインプロテアーゼ阻害剤-pCMBS,pCMB,antipain,leupeptin,E-64,iodoacetic acid,iodoacetic amido3.アスパラギン酸プロテアーゼ阻害剤-pepstatin4.メタロプロテアーゼ阻害剤-o-Phenanthroline,EDTA,上記阻害剤とあらかじめ処理したVeroH細胞に放射性ヨードでラベルしたDTを37℃で取り込ませた。細胞表面に存在するDTをプロナーゼ処理で除いた後、細胞を可溶化した。SDS-PAGE、オートラジオグラフィーを行ない28kD fragmentが存在するかどうかを調べた。その結果、上記の阻害剤では28kD fragmentの出現を押さえることはできなかった。またその時の細胞毒生はなんら影響を受けなかった。今後は阻害剤の細胞膜透過性を考慮しつつ、さらに他の阻害剤を使用して同様の実験を行なう。

The cells of the animal were infected with 28kD, the toxins, the cells, the toxins, the toxins, the It is necessary for 28kD to generate a virus to generate a virus. All kinds of equipment are used to prevent the occurrence of damage in the 28kD market. 1. I don't know what to do. I don't know what to do. PMSF,APMSF,chymostatin,aprotinin2. I don't know how to stop the damage.-pCMBS,pCMB,antipain,leupeptin,E-64,iodoacetic acid,iodoacetic amido3. I don't know what to do. I don't know what to do.-pepstatin4. The VeroH cells are radioactive, the cells are radioactive, the DT is 37 ℃ and the temperature is 37 ℃. There is a DT on the surface of the cell, and the cell can be dissolved after the cell is removed. There is a link between SDS-PAGE and 28kD fragment, which is the same as the line. According to the results and the results above, you can see that there is a significant change in the security of the 28kD fragment. When you are busy, you will be infected by cytopathic acid in the first place. In the future, it is necessary to prevent the membrane permeability test and to prevent the use of the same drug.

项目成果

Mitamura T,et al.: "Structure-function analysis of the diphtheria toxin receptor toxin binding site by site-directed mutagenesis." J Biol Chem.272(43). 27084-27090 (1997)

Mitamura T 等人：“通过定点诱变对白喉毒素受体毒素结合位点进行结构功能分析。”

Izumi Y,et al.: "A metalloprotease-disintegrin,MDC9/meltrin-gamma/ADAM9 and PKCdelta are involved in TPA-induced ectodomain shedding of membrane-anchored heparin-binding EGF-like growth factor." EMBO J.17(24). 7260-7272 (1998)

Izumi Y 等人：“金属蛋白酶解整合素、MDC9/meltrin-gamma/ADAM9 和 PKCdelta 参与 TPA 诱导的膜锚定肝素结合 EGF 样生长因子的胞外域脱落。”